人睪丸特異表達(dá)基因TDRG1 shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá).pdf

1、中圖分類號(hào)UDCIU3721610碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q墨三蘭密級(jí)公玨人睪丸特異表達(dá)基因TDRG1shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)ConstructionofTDRG1shRNAexpressionvectorandstudyontheinterferingeffectofTDRG1shRNAexpressionvectorinNTERA—2cells作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：彭圣林臨床醫(yī)學(xué)外科學(xué)湘雅三醫(yī)

2、院湯育新教授論文答辯日期善啪乙／答辯委員會(huì)主中南大學(xué)2013年5月人睪丸特異表達(dá)基因TDRGlshRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及其表i大還摘要：目的：構(gòu)建靶向人睪丸基因TDRGl的shRNA重組質(zhì)粒表達(dá)載體，并研究其在人惡性畸胎瘤細(xì)胞(NTERA2)I拘表達(dá)。篩選出高效且特異性抑制TDRGl基因表達(dá)的重組質(zhì)粒表達(dá)載體，為下一步研究TDRGl基因?qū)ΣG丸腫瘤生物學(xué)行為的作用奠定基礎(chǔ)。方法：設(shè)計(jì)合成有短發(fā)夾結(jié)構(gòu)靶位TDRGl基因的寡核苷酸，經(jīng)退火成雙

3、鏈，克隆至載體pGPU6／GFP／Neo中，構(gòu)建了TDRGl一shRNA表達(dá)載體，得到重組質(zhì)粒TDRGlshRNA486，TDRGlshRNA738，TDRGlshRNA921和一個(gè)陰性對(duì)照，轉(zhuǎn)化入JMl09大腸桿菌，抽提質(zhì)粒，進(jìn)行酶切和測(cè)序鑒定，分別使用LipofectamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒shRNA至人惡性畸胎瘤細(xì)胞中，再應(yīng)用RealTime—PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后人惡性畸胎瘤細(xì)胞TDRGlmRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：酶切

4、結(jié)果表明，所有質(zhì)粒均為陽性重組質(zhì)粒，經(jīng)基因測(cè)序證實(shí)，插入的DNA片段的序列與設(shè)計(jì)序列完全一致。同時(shí)篩選到轉(zhuǎn)染TDRGlshRNA486的人惡性畸胎瘤細(xì)胞TDRGl基因的mRNA表達(dá)水平明顯抑制(pO01)，并對(duì)TDRGl基因mRNA抑制效率為8489％。結(jié)論：成功構(gòu)建了人睪丸特異性表達(dá)基因TDRGl的shRNA表達(dá)載體，三組TDRGl一shRNA均可在NTERA2細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)，而其中TDRGlshRNA486抑制目的基因的效果最好。圖