TLR-2、TLR-4、NF-kB在中耳膽脂瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、一.目的：
　　膽脂瘤型中耳炎是慢性中耳炎的一種常見類型,其主要特征表現(xiàn)為中耳腔內(nèi)大量增殖的角化鱗狀上皮和鄰近骨質(zhì)破壞以,其中骨質(zhì)破壞是其最主要的特征,能導(dǎo)致嚴(yán)重的顱內(nèi)、外并發(fā)癥,威脅患者生命。目前的研究尚未完全闡明膽脂瘤形成的確切機(jī)理。
　　本研究旨在分析Toll樣受體2(toll-like receptor2,TLR-2)和Toll樣受體4(toll-like receptor4,TLR-4)、核轉(zhuǎn)錄因子(Nuclear

2、 factor-kappa B,NF-kB)在中耳膽脂瘤中的表達(dá)及分布,分析TLR-2、TLR-4及NF-kB之間的相關(guān)性,探討TLR-2、TLR-4、NF-kB在中耳膽脂瘤炎癥反應(yīng)過程中的作用。
　　二.材料與方法：
　　本實(shí)驗(yàn)收集膽脂瘤型中耳炎病人手術(shù)中新鮮標(biāo)本46例,其中15例膽脂瘤患者術(shù)中同時(shí)取外耳道正常皮膚,作為正常對(duì)照。所取標(biāo)本經(jīng)10％福爾馬林固定后,制成石蠟切片。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(S P法)檢測(cè)TLR-2、

3、TLR-4及NF-kB在中耳膽脂瘤及外耳道皮膚中的表達(dá),并采用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)TLR-2、TLR-4及NF-kB染色結(jié)果進(jìn)行定量分析。
　　三.結(jié)果：
　　1.TLR-2在膽脂瘤組織及正常外耳道皮膚中的表達(dá)TLR-2在46例膽脂瘤上皮組織中均呈中等陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),表現(xiàn)為棕黃色顆粒密布于上皮各層和上皮下基質(zhì)細(xì)胞的胞漿中,包括基底細(xì)胞層、棘層、顆粒層、角質(zhì)層,但陽(yáng)性細(xì)胞的分布范圍和頻率各有不同,胞核無著色。在15例正常外耳

4、道皮膚組織中僅表達(dá)于上皮基底層。
　　2.TLR-4在膽脂瘤組織及正常外耳道皮膚中的表達(dá)TLR-4在46例膽脂瘤上皮組織中均呈中等陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),表現(xiàn)為棕黃色顆粒密布于上皮各層細(xì)胞的胞漿中,呈現(xiàn)從基底層向角質(zhì)層染色逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì),胞核無著色。膽脂瘤上皮下可見成纖維細(xì)胞、單核.巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞、少數(shù)為淋巴細(xì)胞等散在的陽(yáng)性細(xì)胞。15例正常外耳道皮膚組織中僅上皮基底層有弱陽(yáng)性表達(dá)。
　　3.NF-kB在膽脂瘤組織及正常外耳道皮膚

5、中的表達(dá)NF-kB在46例膽脂瘤上皮組織中,NF-kB陽(yáng)性細(xì)胞分布于上皮全層,不同膽脂瘤組織的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度不等,多數(shù)標(biāo)本呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);每例標(biāo)本均有胞漿染色,部分標(biāo)本胞核陽(yáng)性著色。膽脂瘤上皮下炎性細(xì)胞及血管上皮細(xì)胞亦可見散在陽(yáng)性表達(dá)。正常15例外耳道皮膚組織見表皮全層的弱陽(yáng)性表達(dá),均為胞質(zhì)表達(dá)。
　　4.計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)TLR-2、TLR-4、NF-kB灰度值(1)TLR-2在46例膽脂瘤上皮組織中的灰度值為138.61±6.

6、20,在15例正常外耳道皮膚中的平均灰度值為95.64±6.20,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=20.73,p<0.05)。(2)TLR-4在46例膽脂瘤上皮組織中的灰度值為140.87±5.23,在15例正常外耳道皮膚中的平均灰度值為100.45±2.88,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=28.48,p<0.05)。(3)NF-kB在46例膽脂瘤上皮組織中的灰度值為155.25±11.72,在15例正常外耳道皮膚中的平均灰度值為95.6

7、5±8.12,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.96,p<0.05)。
　　5.經(jīng)spearman等級(jí)相關(guān)分析,膽脂瘤組織中TLR-2與NF-kB之間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.316,p<0.05);TLR-4與NF-kB之間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.389,p<0.01)。
　　四.結(jié)論：
　　1.TLR-2、TLR-4、NF-kB介導(dǎo)慢性炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答反應(yīng),本研究結(jié)果顯示TLR-2、TLR-4、NF-kB在膽脂瘤

8、組織中的高表達(dá),提示其在中耳膽脂瘤慢性炎癥反應(yīng)過程中發(fā)揮有一定的作用。
　　2.TLR-2感受膽脂瘤炎癥微環(huán)境病原體表面的PAMPs刺激,經(jīng)由胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路,活化核因子NF-kB,NF-kB通過對(duì)多種基因表達(dá)的調(diào)控,調(diào)控眾多炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的表達(dá),參與機(jī)體炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示TLR-2與NF-kB之間存在正相關(guān)關(guān)系,提示TLR-2與NF-kB可能在中耳膽脂瘤炎癥反應(yīng)過程中有協(xié)同作用。
　　3.TLR-4感受膽脂瘤炎癥