等溫擴增檢測HBV S基因方法的建立及臨床應(yīng)用的初步研究.pdf

1、本研究采用等溫擴增技術(shù)，應(yīng)用生物素-鏈親和素系統(tǒng)富集靶序列，目的在于建立一種靈敏度高、特異性強的檢測低拷貝數(shù)核酸樣本的方法.。 由HBV S基因的表達(dá)載體GS115-pPICZS酵母細(xì)胞中提取酵母總RNA。使用偶聯(lián)有捕獲探針的鏈親和素磁粒，通過親和素-鏈生物素反應(yīng)，與靶核苷酸相連，富集樣品中的HBV S基因的的mRNA。以等溫擴增技術(shù)擴增HBVS基因mRNA。擴增產(chǎn)物由1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測。通過優(yōu)化等溫擴增體系，該技術(shù)檢測

2、HBV S基因mRNA的擴增倍數(shù)可達(dá)10<'8>數(shù)量級、靈敏度可達(dá)到2pg/mL，高于逆轉(zhuǎn)錄PCR 200 Pg/mL的靈敏度。 應(yīng)用該研究所建立的磁粒富集靶序列和等溫擴增技術(shù)，選取經(jīng)熒光定量PCR分析HBV DNA含量大于1.0×10<'3>拷貝/mL的血清標(biāo)本，進(jìn)行HBVDNA的檢測，結(jié)果對于HBV的檢測及HBV的分子生物學(xué)、分子流行病學(xué)研究有重要的意義。 等溫擴增反應(yīng)體系在HBV S基因mRNA及血清標(biāo)本中HBV