高濃度氨基酸對(duì)腎小球系膜細(xì)胞外基質(zhì)的影響及其機(jī)制的體外研究.pdf

1、研究目的：本研究模擬高蛋白飲食后體內(nèi)高濃度氨基酸水平，從細(xì)胞水平觀察此種高濃度氨基酸、高糖、高濃度氨基酸高糖混合物對(duì)系膜細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)合成及降解、轉(zhuǎn)化生長因子β1和腎素-血管緊張素系統(tǒng)的影響，來探討高濃度氨基酸對(duì)腎臟系膜細(xì)胞外基質(zhì)的影響及可能機(jī)制，為臨床指導(dǎo)糖尿病患者的飲食結(jié)構(gòu)及治療方面提供理論依據(jù)。　　研究方法：采用體外培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞株為研究對(duì)象，甘露醇(13.3mosM)、高濃度氨基酸(每種氨基酸濃度高于DMEM1.5

2、～6倍，滲透壓上升為13.3mosM)、高糖(30.5mM)、高濃度氨基酸高糖混合物分別刺激系膜細(xì)胞(12h，24h，48h，72h)，以MTT法觀察它們對(duì)細(xì)胞增殖的影響，篩選刺激增殖最明顯的作用時(shí)間；以RT-PCR方法檢測α1-I型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)、血管緊張素Ⅰ受體(AT1)mRNA的表達(dá)水平；放射免疫測定α1-Ⅳ型膠原、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)濃度；ELISA法測定TGF-β1

3、、纖維連接蛋白(Fn)濃度。　　研究結(jié)果：1、高濃度氨基酸、高糖、高濃度氨基酸高糖混合物均能刺激系膜細(xì)胞增殖，48小時(shí)作用最明顯。甘露醇組無明顯刺激增殖作用。2、各種刺激因素作用系膜細(xì)胞48小時(shí)，均可上調(diào)Ⅰ型膠原的基因表達(dá)，下調(diào)MMP-2的基因表達(dá)，刺激Ⅳ型膠原和Fn的蛋白表達(dá)。3、各種刺激因素均可上調(diào)TGF-β1的基因及蛋白表達(dá)。4、高濃度氨基酸和混合物均可刺激AT1的基因表達(dá)上調(diào)，而高糖組未見明顯變化，各組中AngⅡ濃度均明顯高于