姜黃素對梗阻性黃疸大鼠腸黏膜屏障保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 梗阻性黃疸可導(dǎo)致腸黏膜屏障功能障礙并產(chǎn)生嚴(yán)重感染、多器官功能障礙等并發(fā)癥。梗阻性黃疸時(shí)許多病理狀態(tài)的發(fā)生發(fā)展取決于腸道屏障功能，腸功能已是判斷危重患者預(yù)后的重要條件之一，它直接關(guān)系到患者的手術(shù)病死率和并發(fā)癥的發(fā)生率。細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)是導(dǎo)致腸黏膜屏障損傷的重要因素之一。NF-κB作為一種重要的炎癥前基因的早期轉(zhuǎn)錄調(diào)控子，對梗阻性黃疸時(shí)炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展以及調(diào)控起著重要作用。姜黃素有抗炎、抗氧化等多種生物學(xué)作用。研

2、究表明，姜黃素能夠明顯抑制NF-κB的激活，是NF-κB的非特異性抑制劑。本研究通過觀察姜黃素對膽總管結(jié)扎大鼠腸組織形態(tài)學(xué)和炎癥因子的影響，探討姜黃素對實(shí)驗(yàn)性梗阻性黃疸大鼠腸黏膜屏障的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、動物模型的制備：選取健康雄性S-D大鼠，用10％水合氯醛（0.3g/kg）腹腔注射麻醉后，于上腹正中作3 cm切口進(jìn)入腹腔，顯露第一肝門，鈍性游離并用3-0號絲線雙重結(jié)扎膽總管，然后在兩結(jié)扎

3、線間橫斷，分2層縫合腹壁。假手術(shù)組僅進(jìn)行膽總管游離，不結(jié)扎膽總管。
　　 2、實(shí)驗(yàn)分組：健康雄性SD大鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組10只，Ⅰ假手術(shù)對照（sham operation，SO）組、Ⅱ梗阻性黃疸（obstructive jaundice，OJ）組、Ⅲ姜黃素治療（OJ+Curcumin，OJ+Cur）組。Ⅰ、Ⅱ組正常喂養(yǎng)，Ⅲ組自造模當(dāng)天起用姜黃素灌胃100 mg/kg·d，連續(xù)14天。
　　 3、光鏡下觀察大鼠腸

4、組織病理學(xué)變化，并應(yīng)用Image pro plus圖像處理系統(tǒng)測量腸黏膜高度及厚度。
　　 4、采用鱟試劑終點(diǎn)顯色法檢測血漿內(nèi)毒素水平。
　　 5、采剛免疫組織化學(xué)染色（SP）方法檢測腸黏膜中核因子-κB（NF-κB）、細(xì)胞間黏附分子（ICAM-1）的表達(dá)情況。
　　 6、采用放射免疫法檢測血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介索-6（IL-6）水平。
　　 7、應(yīng)用分光光度法測定小腸組織二胺氧化酶

5、（DAO）活性。
　　 結(jié)果：
　　 1、大鼠一般狀態(tài)：膽總管結(jié)扎48 h后大鼠尿液顏色開始變黃，4 d～5 d時(shí)全身皮毛開始轉(zhuǎn)黃，進(jìn)食量逐漸減少。術(shù)后1 wk及2 wk，梗阻性黃疸大鼠近肝側(cè)膽總管囊狀擴(kuò)張，肝臟彌漫性腫大，呈黃褐色。
　　 2、回腸黏膜組織病理學(xué)檢查：肉眼觀察，大體標(biāo)本見梗阻性黃疸大鼠小腸粘膜暗褐色色素沉著。光鏡下觀察，SO組腸黏膜絨毛排列整齊，高度一致，絨毛黏膜完整；OJ組腸黏膜絨毛排列紊亂，

6、絨毛稀疏、斷裂，腸黏膜萎縮，絨毛水腫，部分上皮細(xì)胞壞死脫落，并可見炎性細(xì)胞浸潤；與SO組相比，OJ組大鼠回腸黏膜高度及厚度，變小、變薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。OJ+Cur組腸黏膜病變較OJ組明顯減輕，腸黏膜絨毛排列整齊，腸黏膜增厚，絨毛輕度水腫，未見明顯上皮細(xì)胞脫落，炎性細(xì)胞浸潤減少；應(yīng)用姜黃素后腸黏膜高度及厚度情況明顯好轉(zhuǎn)，與OJ組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。OJ+Cur組與SO組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0

7、1）。
　　 3、血漿內(nèi)毒素含量的變化：OJ組血漿內(nèi)毒素濃度比SO組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；OJ+Cur組內(nèi)毒素濃度與OJ組比較明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；OJ+Cur組與SO組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　 4、血清TNF-α、IL-6含量的變化：OJ組血清TNF-α、IL-6濃度比SO組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；OJ+Cur紕TNF-α、IL-6濃度

8、與OJ組比較明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；OJ+Cur組與SO組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 5、腸組織DAO活性的變化：OJ組腸組織DAO活性較SO組明顯降低，腸黏膜的完整性和功能受到損傷，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；OJ+Cur組較OJ組明顯升高，差異有統(tǒng)討學(xué)意義（P<0.05）；OJ+Cur組與SO組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　 6、NF-κB在腸組組中的表達(dá)：

9、SO組少見NF-κB陽性表達(dá)細(xì)胞，OJ組中可見大量腸上皮細(xì)胞及炎性細(xì)胞胞漿及胞核表達(dá)NF-κB，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），OJ+Cur組NF-κB表達(dá)低于OJ組（P<0.05）：OJ+Cur組與SO組比較無明顯變化（P>0.05）。
　　 7 ICAM-1在腸組織中的表達(dá)：ICAM-1主要表達(dá)于腺體細(xì)胞及炎性細(xì)胞胞漿，以細(xì)胞漿呈棕黃色為陽性表達(dá)。OJ組表達(dá)明顯高于SO組（P<0.01），Cur處理后，ICAM-1表達(dá)降低

10、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；OJ+Cur組與SO組比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P<0.05。
　　 結(jié)論：
　　 1、梗阻性黃疸大鼠腸黏膜存在一定程度損傷。
　　 2、梗阻性黃疸時(shí)NF-κB的表達(dá)增加，可能通過上調(diào)炎性介質(zhì)丁NF-α、IL-6、ICAM-1的表達(dá)，從而造成腸黏膜屏障損傷。
　　 3、姜黃素通過抑制NF-κB及TNF-α的表達(dá)，減少梗阻性黃疸時(shí)炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6、ICAM-1表達(dá)，對