富硒大蒜抗動脈粥樣硬化作用的初步探討.pdf

1、目前，心血管疾病已經(jīng)成為導(dǎo)致世界人口死亡的主要原因，動脈粥樣硬化(AS)是其主要的病理基礎(chǔ)。在AS復(fù)雜的形成機制中，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)引起的內(nèi)皮細胞損傷是最為重要的起始環(huán)節(jié)。大量實驗研究顯示，大蒜和硒均具有抗氧化、抗凝血、降血脂等作用，能夠抑制多種AS形成的危險因素，從而降低心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險。
　　 上世紀90年代開始，人們就考慮將大蒜與硒結(jié)合使用，以增強其抗AS的作用。本課題組早在1996年就已發(fā)現(xiàn)大蒜制品與

2、無機硒聯(lián)合使用能夠降低高脂飲食造成的家兔血脂水平，并能降低人類的胃癌死亡率。但研究中也發(fā)現(xiàn)，簡單地將大蒜制品與無機硒混合使用，會因其pH值不同而彼此間發(fā)生中和反應(yīng)，降低各自的生物活性。另外，無機硒具有蓄積毒性因而不宜長期使用，而有機硒雖然毒性低但制備困難且價格昂貴，也難以長期使用。這些問題都使得如何能將硒與大蒜有效地結(jié)合，且既能避免硒的毒性作用，又簡便、經(jīng)濟成為了一大難題。此時，富硒大蒜的培育成功為解決這一問題提供了新的思路。
　

3、　 大蒜本身具有硒富集作用，若在種植時施加高濃度的硒肥，就可以從外界吸收無機硒，并通過天然的生物轉(zhuǎn)化作用將其轉(zhuǎn)化為有機形式。富硒大蒜不僅兼具硒和大蒜二者的生物活性成分，而且它所含有的硒成分毒性和蓄積性也大大降低。因此，若能證實富硒大蒜具有抗AS作用，則既能為防治心血管疾病提供新的方法，同時也能為富硒大蒜種植打開更為廣闊的市場。
　　 目前，有關(guān)富硒大蒜抗AS作用的研究尚不多見。故此，本研究首先將對富硒大蒜的主要組成部分——大蒜

4、和硒的抗AS作用進行探討。由于AS是一種病理改變過程，臨床上不易檢出和確定。而冠心病作為AS最常導(dǎo)致的心血管疾病之一，在習(xí)慣上常被等同于冠狀動脈粥樣硬化性心臟病。故此，本研究采用冠心病代替AS作為研究對象，利用Meta分析方法對硒和大蒜防治冠心病的作用進行定量綜合，以期評價二者對AS形成與發(fā)展的作用，進而從一定程度上為探討富硒大蒜抗AS的作用提供理論基礎(chǔ)。
　　 現(xiàn)有的針對富硒大蒜的實驗室研究主要集中于其抗癌和抗氧化作用方面，有

5、關(guān)其對內(nèi)皮細胞作用的研究較少。而ox-LDL造成的內(nèi)皮細胞損傷正是AS的重要起始環(huán)節(jié)。若能證實富硒大蒜具有抑制ox-LDL造成的內(nèi)皮細胞損傷的作用，或許就可以從形成機制的角度提示其具有抗AS的作用。因此，本研究也將采用體外細胞實驗的方法，探討富硒大蒜對ox-LDL造成內(nèi)皮細胞損傷中的兩個主要特征——細胞活性下降和細胞凋亡的影響。
　　 研究目的：
　　 1.收集有關(guān)含硒或大蒜制品防治冠心病的隨機對照試驗文獻進行Meta分

6、析，探討使用含硒或大蒜制品能否有效防治冠心病，以期評價二者抑制AS形成與發(fā)展的作用，進而從一定程度上為富硒大蒜抗AS作用提供理論基礎(chǔ)。
　　 2.采用體外細胞實驗的方法，探討富硒大蒜對ox-LDL的抑制內(nèi)皮細胞活性和促細胞凋亡作用的影響，同時比較富硒大蒜、普通大蒜與有機硒的單獨或聯(lián)合使用等四種處理措施在相同條件下的作用，為今后防治AS的研究提供依據(jù)。
　　 研究內(nèi)容和方法：
　　 一、含硒或大蒜制品治療冠心病效果

7、的Meta分析
　　 從中國期刊全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、PubMed等七種中英文數(shù)據(jù)庫中，檢索出2012年1月1日前公開發(fā)表的，以使用含硒或大蒜制品防治冠心病為研究內(nèi)容的中英文隨機對照試驗文獻。對檢索到的文獻進行納入、排除和質(zhì)量評價，從符合入選標準的文獻中提取相關(guān)數(shù)據(jù)資料，經(jīng)異質(zhì)性檢驗后進行定量合并，必要時進行亞組分析和敏感性分析，以Egger's檢驗評價發(fā)表偏倚。全部統(tǒng)計分析采用STATA11.2軟件進行。
　　 二、

8、富硒大蒜抗ox-LDL對內(nèi)皮細胞損傷作用的實驗研究
　　 采用有機溶劑萃取法提取富硒大蒜油和普通大蒜油。氫化物發(fā)生原子熒光法測定富硒大蒜油中的硒含量。甲基四唑鹽(MTT)比色法檢測富硒大蒜油在不同濃度、不同作用時間下對人臍靜脈內(nèi)皮細胞株ECV-304細胞活性率的影響。采用4×3×3析因設(shè)計，檢測富硒大蒜油、普通大蒜油、有機硒、普通大蒜油和有機硒聯(lián)用四種處理措施在24、48、72小時三種作用時間，低、中、高三種濃度下對ox-LDL

9、造成的ECV-304細胞活性下降的影響。流式細胞術(shù)檢測富硒大蒜油、普通大蒜油、有機硒單獨或聯(lián)合使用等四種處理措施對ox-LDL誘導(dǎo)的細胞凋亡的影響。
　　 研究結(jié)果：
　　 一、含硒或大蒜制品防治冠心病效果的Meta分析
　　 1.含硒制品防治冠心病效果的Meta分析
　　 1.1異質(zhì)性檢驗及定量合并結(jié)果:共8篇文獻納入研究，異質(zhì)性檢驗結(jié)果I2=40.9％，合并RR=0.87(0.74，1.02)。

10、>　　 1.2亞組分析結(jié)果:按研究設(shè)計類型為臨床試驗或現(xiàn)場試驗進行亞組分析，合并RR值及其95％可信區(qū)間分別為0.61(0.45，0.83)和0.99(0.82，1.20)。
　　 1.3敏感性分析結(jié)果:剔除4篇質(zhì)量較低的文獻后，異質(zhì)性檢驗結(jié)果I2=0.0％，RR=0.97(0.81，1.16)，與剔除前的結(jié)果相比較變化不大。
　　 1.4發(fā)表偏倚檢測:漏斗圖上可見各研究分布不對稱，Egger's檢驗的P值為0.004

11、，提示存在發(fā)表偏倚。
　　 2.大蒜制品防治冠心病效果的Meta分析
　　 2.1異質(zhì)性檢驗及定量合并結(jié)果:共7篇文獻納入研究，異質(zhì)性檢驗結(jié)果I2＝13.9％，合并RR=0.75(0.51，1.10)。
　　 2.2敏感性分析:剔除1篇現(xiàn)場試驗文獻后，異質(zhì)性檢驗結(jié)果I2=0.0％，RR=0.64(0.42，0.99)，與剔除前的結(jié)果相比較，變化較大。
　　 2.3發(fā)表偏倚檢測:從繪制的漏斗圖上可見各研究分

12、布對稱，Egger's檢驗的P值為0.936，提示不存在發(fā)表偏倚。
　　 二、富硒大蒜抗ox-LDL對內(nèi)皮細胞損傷作用的實驗研究
　　 1.大蒜油中硒含量的檢測:富硒大蒜油中硒含量為198mg/kg。
　　 2.富硒大蒜油對ECV-304細胞活性率的影響:作用24和48小時、濃度低于160μl/L時，內(nèi)皮細胞活性率均高于100％;在濃度達到320μl/L或作用時間為72小時時，細胞活性率均低于100％。
　

13、　 3.富硒大蒜油抗ox-LDL的造成細胞活性率下降的影響:富硒大蒜油各濃度組在各種作用時間條件下的細胞活性率均高于ox-LDL組（P＜0.05）。盡管差異未必均有統(tǒng)計學(xué)意義，但富硒大蒜油組在各種條件下的細胞活性率均呈現(xiàn)出高于普通大蒜、普通大蒜和有機硒聯(lián)用的趨勢。在15μl/L、作用時間為24小時時，有機硒組的細胞活性率低于富硒大蒜油(P=0.003)，而在濃度為60μl/L時，富硒大蒜油的細胞活性率低于有機硒(P＜0.05)。

14、>　　 4.流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率結(jié)果:富硒大蒜油單獨作用下的細胞凋亡率與空白對照組相比較，無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），但明顯低于ox-LDL組(P＜0.05)。富硒大蒜油與ox-LDL共同作用下的細胞凋亡率明顯低于ox-LDL組(P＜0.01)，但與空白對照組和其他處理組間均無差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.含硒制品和大蒜制品均具有緩解冠心病患者臨床癥狀的作用。
　　 2.富硒大蒜在作用時

15、間短、濃度低時，能促進內(nèi)皮細胞活性增加。當作用時間長或濃度高時，則會抑制內(nèi)皮細胞活性。
　　 3.富硒大蒜能夠?qū)筼x-LDL的抑制內(nèi)皮細胞活性作用和促細胞凋亡作用。富硒大蒜或許可以通過這一機制，起到抗AS的作用。
　　 4.在短時間、低濃度的作用條件下，富硒大蒜對抗ox-LDL的抑制細胞活性作用的效果具有優(yōu)于普通大蒜、普通大蒜和有機硒聯(lián)合使用的趨勢，僅在濃度較高時較有機硒差。富硒大蒜對抗ox-LDL的促細胞凋亡作用的效