帶KT3標(biāo)簽嵌合型豬圓環(huán)病毒(PCV1-2-KT3)的構(gòu)建及其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病(Porcine circovirus associated disease，PCVAD)的主要病原，感染后會(huì)引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaning multisystemicwasting syndrome，PMWS)、豬皮炎腎病綜合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS)、豬呼吸道疾病綜合征(Porcine re

2、spiratory disease complex，PRDC)、生殖系統(tǒng)疾病和其他疾病。其在世界范圍內(nèi)廣泛流行，引起養(yǎng)豬業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　疫苗接種是預(yù)防PCV2感染的有效手段，而PCV2在豬群中多為亞臨床感染，帶有其他抗原表位的重組疫苗免疫豬群后，可通過血清學(xué)等方法有效區(qū)分自然感染和疫苗免疫，鑒定豬群是否產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。本研究構(gòu)建出帶有KT3標(biāo)簽的感染性克隆，拯救出重組活病毒，并初步研究其安全性和免疫原性。
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3、.嵌合型豬圓環(huán)病毒1-2 KT3感染性克隆的構(gòu)建
　　本研究通過重疊延伸PCR，將KT3標(biāo)簽重組至PCV1-2的Cap蛋白C末端，構(gòu)建出單拷貝質(zhì)粒pBSK(+)-PCV1-2 KT3 KpnⅠ，并構(gòu)建出單拷貝質(zhì)粒T-PCV1-2 KT3 BstEⅡ、具有2個(gè)完整的PCV復(fù)制起始區(qū)的感染性克隆pBSK(+)-PCV1-2 KT3 EKS(EKS)以及具有1個(gè)完整的PCV復(fù)制起始區(qū)感染性克隆pBKS(+)-PCV1-2 KT3 PEK

4、(PEK)。分別將EKS、PEK和環(huán)化DNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，并將2個(gè)單拷貝質(zhì)粒以共轉(zhuǎn)染方式電轉(zhuǎn)至細(xì)胞中。結(jié)果表明四種方法雖然拯救效率有差異，但均能拯救出PCV1-2 KT3活病毒，病毒滴度能達(dá)到104.8_1050 TCID50/mL。
　　2.嵌合型PCV1-2 KT3活病毒作為標(biāo)簽疫苗的初步研究
　　應(yīng)用本室構(gòu)建的嵌合型PCV1-2 KT3活病毒與PCV1-2病毒接種PCV2抗原抗體陰性商品豬。將8頭豬隨機(jī)分成3組，第一組3頭