草甘膦誘導(dǎo)高表達基因及啟動子的克隆和功能分析.pdf

1、目前報道的抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物中，驅(qū)動抗性基因表達的都是強表達的組成型啟動子，使這些抗草甘膦基因幾乎在轉(zhuǎn)基因植物的所有部位和所有發(fā)育階段都高效表達，這無疑增加了植株的代謝負(fù)擔(dān)，造成物質(zhì)和能源上的巨大浪費。為了使外源抗草甘膦基因在轉(zhuǎn)基因植物體內(nèi)發(fā)揮作用的同時盡可能減少對受體植物的不利影響，本研究的主要目的是分離草甘瞵脅迫誘導(dǎo)高表達基因及啟動子，以期為進一步利用該啟動子驅(qū)動外源抗草甘膦基因或其它功能基因只在草甘膦噴施后高效表達奠定基礎(chǔ)。　　

2、本研究通過DDRT-PCR技術(shù)，篩選40對引物組合，從棉花和大豆中共獲得65個誘導(dǎo)前后表達量有明顯差異的EST序列。其中從大豆中獲得正調(diào)控片段31個，負(fù)調(diào)控片段8個；從棉花中獲得正調(diào)控片段25個，負(fù)調(diào)控片段1個。BLAST結(jié)果表明：草甘膦誘導(dǎo)的EST序列與水楊酸誘導(dǎo)、茉莉酸激發(fā)、NaCl處理、冷脅迫、熱激、病原體處理等其它非生物脅迫誘導(dǎo)的序列有高達82％以上的同源性。進一步通過RT-PCR篩選出草甘膦誘導(dǎo)后在棉花中表達量最顯著增加的序列