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1、顱內(nèi)動(dòng)脈瘤(Intracranial Aneurysm,IA)的發(fā)病率約為2.3-6%,多見(jiàn)于青壯年(平均年齡約為50歲),致殘率及死亡率高。由該病引發(fā)蛛網(wǎng)膜下腔出血的死亡率為30%-40%,大于1/3的患者遺留有嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙,IA是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)生存健康的復(fù)雜疾病。目前IA的病因?qū)W說(shuō)主要由先天性血管壁發(fā)育不良和顱內(nèi)動(dòng)脈獲得性退行性病變等理論構(gòu)成。
現(xiàn)有的研究表明:IA是由多種基因和多種環(huán)境因素相互作用進(jìn)而導(dǎo)致多種
2、基因表達(dá)調(diào)控失衡的復(fù)雜疾病。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),部分顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者呈家族性發(fā)病傾向,IA患者的一級(jí)親屬發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)明顯增高,而且動(dòng)脈瘤破裂機(jī)率是二級(jí)親屬的7倍。顱內(nèi)動(dòng)脈瘤可與馬凡綜合征、常染色體顯性遺傳性多囊腎、埃勒斯-當(dāng)洛綜合征等遺傳性疾病并發(fā),因此顯示遺傳學(xué)因素在IA的發(fā)病機(jī)理上有重要意義。
我們運(yùn)用高通量的基因芯片技術(shù)對(duì)7例顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織的基因表達(dá)譜進(jìn)行初步分析。顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織總mRNA表達(dá)譜與正常血管組織有明顯差異,一
3、系列已知以及未知的基因均在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織中高表達(dá)。發(fā)現(xiàn)其中結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤上高表達(dá)7.073倍,并且在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤標(biāo)本的RNA和蛋白水平得到證實(shí)。
顱內(nèi)動(dòng)脈瘤手術(shù)中存在載瘤動(dòng)脈及其分支血管、穿通支血管狹窄或痙攣以及動(dòng)脈瘤頸殘留等并發(fā)癥,如何術(shù)中評(píng)價(jià)動(dòng)脈瘤夾閉的效果一直是神經(jīng)外科醫(yī)生思考的問(wèn)題。吲哚菁綠(Indocyanine Green,
4、ICG)熒光血管造影是近年來(lái)出現(xiàn)的術(shù)中評(píng)價(jià)血管通暢性的簡(jiǎn)便易行的方法,相對(duì)與其他的術(shù)中檢查技術(shù),ICG造影費(fèi)用低廉,操作簡(jiǎn)便,耗時(shí)短,精確度也較高。早期應(yīng)用于肝纖維化診斷和眼科手術(shù)中,而且ICG排泄試驗(yàn)與肝纖維化的細(xì)胞因子TGF-β1表達(dá)具有良好相關(guān)性,ICG可以作為診斷早期肝纖維化的敏感指標(biāo)。我們通過(guò)近期97例顱內(nèi)動(dòng)脈瘤手術(shù)患者術(shù)中使用ICG的經(jīng)驗(yàn)得出結(jié)論:ICG熒光造影是一種術(shù)中監(jiān)測(cè)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤頸是否殘留、載瘤動(dòng)脈是否狹窄及穿通支血管
5、是否閉塞的重要檢查手段,有望將來(lái)成為顱內(nèi)動(dòng)脈瘤手術(shù)中的常規(guī)檢查手段。
第一部分、利用基因芯片技術(shù)篩選顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的特異性基因
目的:收集顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織標(biāo)本以及正常血管組織標(biāo)本,提取總mRNA,利用總mRNA基因表達(dá)芯片,篩選顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的特異性表達(dá)的候選基因。
方法:
1.收集7例顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者的手術(shù)組織樣本以及正常血管的手術(shù)組織樣本。提取組織總mRNA,鑒定mRNA質(zhì)量。通過(guò)mRNA
6、表達(dá)芯片,篩選在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤中表達(dá)增高的候選癌基因。
2.采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。通過(guò)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn),去除微陣列的假陽(yáng)性結(jié)果,檢驗(yàn)過(guò)程均以P≤0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。
結(jié)果:
1.顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織mRNA表達(dá)譜與正常血管組織mRNA表達(dá)譜具有明顯差異。
2.顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織mRNA表達(dá)譜中,CTGF,GAB1,PTX3以及CTSL表達(dá)相對(duì)正常血管組織mRNA表達(dá)譜明顯
7、升高(p<0.001),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論:顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織總mRNA表達(dá)譜與正常血管組織有明顯差異,一系列已知以及未知的基因均在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織中高表達(dá)。
第二部分、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在人顱內(nèi)動(dòng)脈瘤標(biāo)本中表達(dá)
目的:我們的前期基因芯片數(shù)據(jù)證實(shí)CTGF在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織中高表達(dá),我們?cè)赗NA和蛋白水平探討CTGF在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織中的表達(dá)情況,為顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的病因研究提供線索。
方法:
8、r> 1.顱內(nèi)動(dòng)脈瘤標(biāo)本16例,取同期急診顱腦外傷病人手術(shù)中的無(wú)法保留的顳淺動(dòng)脈及術(shù)中減壓的腦組織動(dòng)脈血管作為對(duì)照。運(yùn)用半定量RT-PCR和Western Blot及免疫組化染色分析CTGF在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤上的表達(dá)。
2.對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié)果:
1.動(dòng)脈瘤壁中膜和外膜CTGF表達(dá)陽(yáng)性率較內(nèi)膜高(X2=9.94,P<0.05)。
2.Western Blot檢測(cè)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤(
9、IA)及腦外傷減壓手術(shù)的正常血管(NA)及RT-PCR檢測(cè)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤(IA)及顳淺動(dòng)脈(STA)表達(dá)CTGF水平。與對(duì)照組(NA/STA)比較試驗(yàn)組(IA)CTGF表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:CTGF可能與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)生和基質(zhì)重塑有關(guān)。顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)生,生長(zhǎng)和破裂是個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,CTGF可能是影響因素之一。
第三部分、吲哚菁綠熒光造影在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤手術(shù)中的應(yīng)用
目的:
10、探討吲哚菁綠(ICG)腦血管造影在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤手術(shù)中的作用。
方法:2007年3月至2011年3月開(kāi)顱手術(shù)治療的顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者97例,帶有熒光功能的手術(shù)顯微鏡下觀察術(shù)野中血管,指導(dǎo)手術(shù)操作。術(shù)后行3DCTA或DSA檢查,評(píng)估術(shù)中ICG熒光造影對(duì)開(kāi)顱手術(shù)治療顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的作用。
結(jié)果:術(shù)中確認(rèn)動(dòng)脈瘤頸殘留5例,載瘤動(dòng)脈分支血管閉塞2例,穿通血管誤夾7例,重新調(diào)整動(dòng)脈瘤夾位置后,再次熒光血管造影,證實(shí)動(dòng)脈瘤頸夾閉滿意
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