microRNA-34a對結(jié)腸癌細(xì)胞遷移侵襲能力的影響.pdf

1、目的：
　　本文旨在研究miR-34a影響結(jié)腸癌細(xì)胞遷移侵襲能力的分子機(jī)理。通過生物信息學(xué)和實(shí)驗(yàn)方法，對其靶基因Fra-1進(jìn)行預(yù)測和驗(yàn)證，深入研究miR-34a及其靶基因Fra-1對結(jié)腸癌遷移侵襲的影響和下游相關(guān)基因的表達(dá)，為miR-34a在結(jié)腸癌預(yù)后判斷和臨床診療等方面提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.使用生物信息學(xué)軟件Targetscan human6.0、PicTar、Sanger miRNA database等預(yù)

2、測miR-34a的靶基因Fra-1，并使用熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)及Westernblot對其進(jìn)行驗(yàn)證。
　　2.在HCT116和RKO細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-34a，使用transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移和侵襲變化，并使用Real-Time PCR和Western blotting檢測MMP-1，MMP-9，c-Met等相關(guān)基因的mRNA和蛋白的表達(dá)水平變化。
　　3.在HCT116和RKO細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siFra-1，使用tra

3、nswell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移和侵襲變化，并使用Real-Time PCR和Western blotting檢測相關(guān)基因MMP-1，MMP-9，c-Met等mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　4.在HCT116和RKO細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染pT-Fra-1和miR-34a，使用transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移和侵襲變化，并使用Real-Time PCR和Western blotting檢測相關(guān)基因MMP-1，MMP-9，c-Met等mRNA和蛋

4、白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.miR-34a可以靶向到所構(gòu)建載體pLuc-Fra-1上的Fra-1的3'UTR，使熒光素酶報(bào)告基因的酶活性降低。
　　2.在結(jié)腸癌細(xì)胞系中過表達(dá)miR-34a后，F(xiàn)ra-1的mRNA和蛋白水平降低；MMP-1，MMP-9，c-Met等基因的mRNA和蛋白表達(dá)降低，細(xì)胞的遷移侵襲受到抑制。
　　3.在結(jié)腸癌細(xì)胞系中抑制Fra-1的表達(dá)，MMP-1，MMP-9，c-Met等基因的mR

5、NA和蛋白表達(dá)降低，細(xì)胞的遷移侵襲受到抑制。
　　4.在結(jié)腸癌細(xì)胞系中共轉(zhuǎn)染pT-Fra-1和miR-34a，高表達(dá)的Fra-1可以部分逆轉(zhuǎn)miR-34a對遷移侵襲的影響。同時(shí)可以部分恢復(fù)被miR-34a抑制的MMP-1，MMP-9，c-Met等基因表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1.Fra-1是miR-34a潛在的靶基因。
　　2.miR-34a能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移侵襲，降低Fra-1，MMP-1、MMP-9、