DATS對(duì)HL-60細(xì)胞NADPH氧化酶活性的影響及機(jī)制.pdf

1、南華大學(xué)碩士學(xué)位論文DATS對(duì)HL60細(xì)胞NADPH氧化酶活性的影響及機(jī)制姓名：田志臻申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：唐圣松200705012DATS對(duì)HL60細(xì)胞NADPH氧化酶活性的影響及機(jī)制中文摘要目的：目的：研究DATS對(duì)HL60細(xì)胞NADPH氧化酶活性的影響及機(jī)制，尋找DATS誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生的靶點(diǎn)，為抗腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)。方法：方法：硝基四氮唑藍(lán)（NBT）還原實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NADPH氧化酶活性；RTPCR檢測(cè)N

2、ADPH氧化酶亞基mRNA(gp91phoxp47phoxp22phoxRac2和Rac1)的表達(dá)Westernblot檢測(cè)蛋白(p67phoxgp91phox和Rac2)表達(dá)變化。結(jié)果：結(jié)果：DATS處理HL60細(xì)胞1小時(shí)，NBT還原反應(yīng)陽性率與對(duì)照組相比差異無顯著性(P0.05)；DATS處理HL60細(xì)胞3小時(shí)，NBT還原反應(yīng)陽性率呈濃度依賴性增加150μM為峰值；DATS處理HL60細(xì)胞6小時(shí)，NBT還原反應(yīng)陽性率在100μM達(dá)到

3、峰值，之后濃度依賴性下降；處理12小時(shí)后與對(duì)照組相比差異無顯著性(P0.05)。DATS能誘導(dǎo)HL60細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶復(fù)合物成分mRNA（gp91phoxp47phoxp22phoxRac2和Rac1）和蛋白（Rac2和gp91phox）的表達(dá)，這種誘導(dǎo)效應(yīng)有時(shí)間和濃度依賴性。用150μMDATS處理HL60細(xì)胞0h－12hNADPH氧化酶各亞基mRNA表達(dá)水平，在1小時(shí)開始升高，在3小時(shí)達(dá)到峰值；NADPH氧化酶亞基Rac2和g

4、p91phox蛋白表達(dá)在3小時(shí)達(dá)到高峰，亞基p67phox的蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比無明顯變化。用不同濃度的DATS處理HL60細(xì)胞3小時(shí)，mRNA（gp91phoxp47phoxp22phoxRac2和Rac1）表達(dá)在DATS濃度為150μM達(dá)到峰值。Rac2和gp91phox亞基蛋白表達(dá)有濃度依賴性，p67phox蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比無明顯變化。DATS處理HL60細(xì)胞后引起NADPH氧化酶Rac2和p67phox的轉(zhuǎn)位。DATS處理H

5、L60細(xì)胞后，p67phox亞基和Rac2亞基在胞漿中的含量降低，而在膜中的含量升高，Rac2和p67phox在DATS處理后從胞漿轉(zhuǎn)位到胞膜，并且這種變化有時(shí)間依賴性和濃度依賴性，用150μMDATS處理HL60細(xì)胞0h－12hWesternblot結(jié)果顯示：Rac2和p67phox的轉(zhuǎn)位在3h時(shí)達(dá)高峰（P0.05）。用不同濃度的DATS處理HL60細(xì)胞3小時(shí)，Westernblot結(jié)果顯示Rac2和p67phox的轉(zhuǎn)位時(shí)間依賴性的增