脆江蘺多糖的提取分離及抗腫瘤活性研究.pdf

1、腫瘤是當今世界直接危及人類生命的一種最常見的疾病。傳統放、化療藥物不僅可殺死腫瘤細胞，對正常細胞的傷害也較大；因此，安全性高、毒性低的抗腫瘤藥物的研發(fā)已受到世界各國腫瘤研究的重視。具有免疫調節(jié)活性、抗腫瘤功效的天然大分子多糖，對腫瘤的抑制效果好，毒副作用??；用于腫瘤的輔助治療安全性高，可行性強。
　　脆江蘺是一種新興養(yǎng)殖海藻，目前已在廣東南澳縣人工養(yǎng)殖成功，可大面積培養(yǎng)。然而與其應用的報道幾乎處于空白，開展相關研究已迫在眉睫。因此

2、，本文以脆江蘺為實驗材料，研究其多糖的提取、分離工藝條件及組成；在發(fā)現脆江蘺多糖具有抗氧化活性的基礎上，進一步研究其體內外抗腫瘤作用及作用機制，以期為脆江蘺的開發(fā)利用提供理論依據。具體內容如下：
　　1）響應面法優(yōu)化多糖提取工藝條件
　　通過單因素實驗，確定響應面法優(yōu)化分析的自變量因素，通過整個實驗區(qū)域內自變量的優(yōu)化組合，得到脆江蘺多糖的最優(yōu)提取工藝條件為：浸提溫度93.1℃、料液比1:60.1、超聲作用時間35.8min。

3、在此條件下，脆江蘺多糖（GLP）提取得率為16.75％。
　　2）多糖的分離純化和組成分析
　　先后采用DEAE C-52和Sephadex G-100柱層析對多糖粗提物進行分離純化。得到三個多糖級分，分別為 GLP-1、GLP-2，GLP-3，經化學分析和紅外光譜等
　　分析表明脆江蘺多糖由 D-半乳糖和3,6-內醚半乳糖（3,6-AG）組成，為具有α-糖苷鍵的硫酸多糖。
　　3）多糖自由基清除能力測定

4、　　測定了多糖對自由基的清除活性，結果表明：脆江蘺多糖具有較強的自由基清除能力，對·OH和DPPH·自由基的清除率分別高達59.15%和33.78%，表現出較強的抗氧化活力。
　　4）體外抗腫瘤實驗
　　采用MTT法考察脆江蘺多糖對體外培養(yǎng)的EC-109、MCF-7、HepG-2、HeLa細胞增殖的影響，并初步探討其腫瘤抑制機制。得到實驗結果為：脆江蘺多糖濃度為1000μg/mL時，對HeLa、HepG-2、MCF-7、EC

5、-109細胞的抑制率分別達到49.11%，41.18%，34.98%，31.33%，并呈現一定量效關系。觀察抑制率最高的Hela細胞的形態(tài)變化，結合Annexin V-FITC/PI雙熒光染色，發(fā)現：劑量濃度范圍內，隨著GLP給藥劑量的增加，凋亡晚期/壞死的細胞數量不斷增多，而未經處理的陰性對照僅有少量細胞凋亡；表明GLP通過誘導Hela細胞凋亡而抑制其增殖。
　　5）體內抗腫瘤實驗
　　以S180小鼠為實驗模型，5-氟尿嘧

6、啶作陽性藥物，考察脆江蘺多糖對S180肉瘤生長的抑制活性，同時通過測定荷瘤小鼠免疫系統各項生化指標，探討GLP的抗腫瘤機制。結果表明模型小鼠胸腺和脾臟指數顯著下降，免疫器官受損，而陽性藥物在抑制腫瘤生長的同時對免疫器官也有較大程度的損害，毒副作用較大；脆江蘺多糖對S180荷瘤小鼠具有較強的抑瘤活性，當腹腔注射劑量為100mg/kg bw d-1時，對S180肉瘤的抑制率達到34.75%，高于中劑量灌胃組（200mg/kg bw d-1）

7、的腫瘤抑制率（31.35%）。同時，給予脆江蘺多糖的荷瘤小鼠免疫器官指數顯著增大（P＜0.01），并激活了淋巴細胞的增殖分化，血清IL-2水平、IFN-γ水平極顯著上升（P＜0.01），IL-10水平極顯著下降（P＜0.01），對機體免疫系統表現出較好的保護作用。對荷瘤小鼠腫瘤組織病理形態(tài)學觀察，可見隨著脆江蘺多糖給藥劑量的增加，腫瘤組織壞死程度加重，腫瘤細胞核溶解，細胞融合，結構不清。結果顯示，脆江蘺多糖具有較強的抗腫瘤活性，且毒副作