急性冠脈綜合征患者血漿IL-18與LPA、MMP-9的相關(guān)性研究.pdf

1、一、研究背景和立題依據(jù)
　　 冠心病(Coronary Heart Disease，CHD)是指冠狀動脈發(fā)生粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞，和(或)冠狀動脈發(fā)生痙攣引起心肌缺血缺氧或壞死而導(dǎo)致的心臟疾病，是世界范圍內(nèi)危害人類健康的重大疾病之一。在歐洲和美國心血管疾病構(gòu)成了首要死亡原因，其中冠心病分別占50％和70％。冠心病中急性冠脈綜合征(Acute Coronary Syndrome，ACS)是以冠狀動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定為基本病

2、理生理特點，以急性心肌缺血為共同特征的一組臨床綜合征，包括不穩(wěn)定性心絞痛、非ST段抬高型心肌梗死、ST段抬高型心肌梗死。一直以來，ACS發(fā)病急，病情危重，病死率高。據(jù)統(tǒng)計，全球每年有1700萬人死于心血管疾病，而其中一半以上死于急性心肌梗死。近十年來，我國急性心肌梗死的發(fā)病率一直在呈上升趨勢，2008年我國死于急性心肌梗死患者人數(shù)在50萬左右。因此，預(yù)防ACS的發(fā)生、發(fā)展，阻止病情惡化和防止復(fù)發(fā)，改善患者的生活質(zhì)量，是當(dāng)前從事心血管研究

3、人員的重要責(zé)任，而尋找一種準(zhǔn)確可靠的預(yù)測斑塊不穩(wěn)定的方法是重中之重。相對于影像學(xué)檢查而言，血漿生物標(biāo)志物檢測是一種有望被臨床廣泛采用且經(jīng)濟(jì)實用的檢測方法。
　　 白介素-18(interleukin-18，IL-18)是Okamura等在1995年發(fā)現(xiàn)并被克隆的促炎因子和炎癥標(biāo)記物，在炎癥反應(yīng)鏈及先天性和后天獲得性免疫疾病中起著重要的調(diào)節(jié)作用。IL-18主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，其cDNA編碼193個氨基酸，IL-1β轉(zhuǎn)化酶在N端As

4、p位點將其水解為有活性的IL-18，再通過與其受體構(gòu)成配體-受體復(fù)合物，引起生物學(xué)效應(yīng)。IL-18作為一種多效能前炎癥因子和炎癥標(biāo)記物，其與AS發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。IL-18具有潛在的臨床應(yīng)用價值，在ACS的發(fā)病過程中可能起到重要作用，可作為心血管疾病危險因素的評價工具。
　　 溶血磷脂酸(1ysophosphatidic acid，LPA)作為一種細(xì)胞膜脂類衍生物，是目前已知的最小、最簡單的甘油磷脂分子，系統(tǒng)命名為：1-脂酰-

5、甘油-3-磷酸，其被認(rèn)為是磷脂生物合成早期階段的關(guān)鍵性前體，主要在血小板的活化和低密度脂蛋白輕度氧化過程中產(chǎn)生，其次為成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞等。Maolenaar首次發(fā)現(xiàn)由活化的血小板產(chǎn)生的LPA可與靶細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合，從而影響靶細(xì)胞的功能。近年來研究發(fā)現(xiàn)LPA在血栓形成中具有重要作用，其對高血壓、動脈粥樣硬化、心肌梗死和腦卒中等疾病的發(fā)生有重要意義。
　　 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metall

6、oproteinase-9，MMP-9)又稱明膠酶B，是刪P家族中的一個重要成員，主要由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、泡沫細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等合成和分泌，可特異性的與Ⅳ型膠原和明膠結(jié)合，對血管壁的基底膜和細(xì)胞外成分具有清除作用，使纖維帽崩潰影響斑塊的穩(wěn)定性。MMP-9不僅能促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展，并且是影響AS斑塊穩(wěn)定性的主要因素。有研究表明，LPA能活化單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，促進(jìn)其表達(dá)和分泌MMPs，而后者的表達(dá)和活化是LPA導(dǎo)致斑塊不

7、穩(wěn)定或破裂的主要因素之一。
　　 目前，大量基礎(chǔ)和臨床研究表明越來越多的生物標(biāo)志物有助于預(yù)測ACS患者動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性和早期識別易損斑塊，但如何確立一種準(zhǔn)確而有效的方法尚無定論。本研究選擇近年來研究相對較熱的三項指標(biāo)IL-18、LPA和MMP-9通過ELISA法檢測其血漿表達(dá)水平，以期通過聯(lián)合指標(biāo)判斷冠狀動脈斑塊穩(wěn)定性，從而為臨床上早期發(fā)現(xiàn)冠心病高危病人以及為指導(dǎo)冠心病的治療提供幫助。同時，我們對IL-18、LPA與MMP

8、-9三者在ACS中的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，進(jìn)一步明確三者之間的關(guān)系，為闡明動脈粥樣硬化的機(jī)制提供研究基礎(chǔ)。
　　 二、研究目的
　　 1、探討IL-18、LPA、MMP-9三者在ACS患者血漿表達(dá)水平；
　　 2、探討IL-18、LPA、MMP-9三者水平與冠脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系；
　　 3、探討IL-18、LPA、MMP-9三者之間的相關(guān)性。
　　 三、研究內(nèi)容和方法
　　 1.研究對

9、象
　　 1.1入選標(biāo)準(zhǔn)
　　 收集2009年10月至2010年2月在中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院住院，根據(jù)臨床表現(xiàn)、心電圖、心肌損傷標(biāo)志物的改變、心臟超聲以及冠狀動脈造影等明確診斷為CHD的患者62例，其中ACS患者52例(男24例，女28例，年齡64.2±9.4歲)，穩(wěn)定型心絞痛患者10例(男6例，女4例，年齡62.1±7.7歲)。同期住院經(jīng)冠脈造影證實冠脈正常者18例(男4例，女14例，年齡63.1±7.6歲)。

10、　　 1.2排除標(biāo)準(zhǔn)
　　 ①、年齡大于80歲或小于18歲；
　　 ②、入院時有癥狀性心力衰竭表現(xiàn)(NYHAⅡ以上)；
　　 ③、入院時行急診PCI或溶栓治療
　　 ④、患嚴(yán)重的心肌病、心臟瓣膜疾病；
　　 ⑤、嚴(yán)重的肝、腎功能不全；
　　 ⑥、腦血管疾病、腫瘤、感染、自身免疫疾??；
　　 ⑦、一個月內(nèi)服用抗血小板聚集藥物、他汀類藥物及非甾體抗炎藥(可能影響LPA、MMP-9的檢

11、測結(jié)果)；
　　 ⑧、合并周圍血管疾病或周圍血管栓塞性疾病等。
　　 1.3實驗分組
　　 1.3.1根據(jù)CHD的臨床類型分組：穩(wěn)定型心絞痛(SAP)組10例，ACS組包括：不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)組32例、急性心肌梗死(AMI)組20例。
　　 1.3.2根據(jù)冠脈造影顯示的冠脈病變支數(shù)分組：單支病變(single vessel，SV)組37例；雙支病變(double vessel，DV)組15例；三支病

12、變(triple vessel，TV)組10例。
　　 冠脈造影顯示管腔狹窄≥50％者或左冠狀動脈主干直徑狹窄≥50％為有意義病變，則認(rèn)為該支血管為病變血管。若左前降支、左回旋支或右冠狀動脈中有一支狹窄者均歸為單支病變組；其中2支有病變者歸為雙支病變組；其中3支均有病變者歸為三支病變組。對于左主干病變者，無論左前降支、回旋支或右冠狀動脈有無病變，都?xì)w為三支病變組。
　　 2.研究方法
　　 2.1臨床資料收集

13、r>　　 詳細(xì)詢問病史，認(rèn)真進(jìn)行體格檢查。將每天吸煙至少一支且持續(xù)至少一年定義為吸煙者。糖尿病者定義為既往診斷現(xiàn)在使用降糖藥或飲食控制治療者，或以前未治療的患者兩次空腹靜脈血糖大于等于7.0mmol/L。高血壓是指正在接受降壓藥治療者或至少三次非同日安靜狀態(tài)下收縮壓≥140mmHg和/或舒張壓≥90mmHg。高膽固醇血癥指正在接受降膽固醇藥治療者或血清總膽固醇水平≥200mg/dL。測量身高(m)、體重(kg)、血壓(mmHg)，計算

14、BMI(kg/m2)。
　　 2.2標(biāo)本采集和檢測：
　　 IL-18、MMP-9檢測：安靜狀態(tài)下抽取肘靜脈血2ml收集于EDTA抗凝管中，1h內(nèi)3500rpm離心10min，取上清液約lml，保存于-80℃冰箱待檢。
　　 LPA檢測：所有患者于入院隔日清晨，安靜狀態(tài)下抽取空腹肘靜脈血4ml，置于抗凝管(北京泰福仕科技公司提供)中，3500rpm離心10min，取上清液約1ml，保存于-80℃冰箱，3個月內(nèi)集中

15、檢測。LPA、MMP-9及IL-18的檢測均用ELISA法完成。
　　 所有患者于安靜狀態(tài)下抽取靜脈血3ml于無菌干燥試管中，立即送我檢驗科行HDL、LDL-c、CK-MB、hs-CRP、血糖等檢查。
　　 2.3統(tǒng)計方法
　　 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。所有計量資料服從正態(tài)分布的用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，非正態(tài)分布的用中位數(shù)(全距)表示，正態(tài)性檢測用K-S檢驗。多組資料間的變量不同用Kru

16、skal-Wallis H秩和檢驗，兩兩之間比較用Bonferroni法檢驗。計數(shù)資料的描述用率與構(gòu)成比表示，采用卡方檢驗。如果資料服從雙變量正態(tài)分布，采用pearson直線相關(guān)分析，如果資料不服從雙變量正態(tài)分布，采用Spearman秩相關(guān)分析。以雙側(cè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 四、結(jié)論
　　 1.ACS患者血漿IL-18、LPA、MMP-9的表達(dá)水平隨著心肌缺血程度的加重、冠脈病變支數(shù)的增加、冠脈狹窄程度的