重組人神經生長因子在大腸桿菌中的誘導表達及其分離純化研究.pdf

1、人神經生長因子（human nerve growth factor，簡稱hNGF）是人體中一種對正常神經細胞有營養(yǎng)作用，對損傷神經修復機能有調節(jié)作用的生物活性因子，它可維持交感神經和感覺神經的生存，促進神經細胞的分化，決定軸突的伸展方向。對促進大腦的發(fā)育，神經系統(tǒng)的生長，損傷神經的再生和功能恢復具有決定性作用。 hNGF的 β亞基單體有118個氨基酸，有3對活性必需的鏈內二硫鍵，這三對二硫鍵使其在作為包涵體表達時復性困難，生物活

2、性不穩(wěn)定；用分泌系統(tǒng)表達時容易造成溶菌、活性和回收率非常低等問題，使其產業(yè)化的進程非常緩慢。大腸桿菌表達系統(tǒng)作為基因工程研究最早開發(fā)的安全、經典的標準化表達系統(tǒng)，具有其他表達系統(tǒng)所不具備的明顯優(yōu)勢。但大腸桿菌表達系統(tǒng)仍然具有不完善的地方，如蛋白表達時易形成不正確折疊，導致部分蛋白質失活，影響生物活性等。為了有效表達rhNGF，本課題將rhNGF與大腸桿菌硫氧還蛋白進行融合表達，硫氧還蛋白引導其后的蛋白正確折疊，呈可溶性表達，具有天然生物

3、學活性。 課題研究了rhNGF的表達載體構建、在大腸桿菌中的表達和分離純化及結構和生物活性分析。經發(fā)酵工藝研究，融合蛋白表達量約占總蛋白的17.5％；純化后，蛋白的純度可達到95％以上，活性為4.0×104 U/ml左右，比活性約為1.2×105 U/mg，活性回收率為26％。樣品經過Western blot試驗、質譜分析、園二色譜等分析，結果證明本課題構建的工程菌pTHNGF／JM109表達的rhNGF結構正確。 本課