水稻雄性不育突變體的遺傳與定位分析.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)用60Coγ對(duì)粳稻(japonicacultivar.L)9522進(jìn)行輻射誘變，得到一隱性單基因控制的雄性不育突變體。半薄切片和掃描電鏡觀察表明該突變體花藥在發(fā)育初期正常，在減數(shù)分裂后期開(kāi)始出現(xiàn)異常，小孢子凹陷為空泡、萌發(fā)孔破裂、花藥外壁的結(jié)構(gòu)異常。脂質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)突變體花藥角質(zhì)總量明顯下降，單位面積角質(zhì)單體含量中，長(zhǎng)鏈脂肪酸下降最明顯。之前的研究已經(jīng)使用圖位克隆的方法將突變體突變基因座位定位在4號(hào)染色體上的分子標(biāo)記OS409

2、與XY409-3之間，橫跨15BAC克隆。通過(guò)全基因組重測(cè)序的方法將測(cè)序結(jié)果與野生型對(duì)比，發(fā)現(xiàn)在定位區(qū)間內(nèi)有一區(qū)段疑似缺失，并且最終通過(guò)PCR擴(kuò)增以及測(cè)序證實(shí)了突變體存在大片段缺失。為了研究造成突變體雄性不育表型的原因，我們對(duì)缺失片段內(nèi)的基因進(jìn)行篩選，通過(guò)表達(dá)模式分析、基因芯片分析、基因共表達(dá)分析、同源比對(duì)等方法初步篩選出三個(gè)候選基因:CYP87、HOTHEAD、CYP704。對(duì)候選基因分別構(gòu)建互補(bǔ)載體，轉(zhuǎn)化到突變體中，進(jìn)行互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，目