COX-2選擇性抑制劑塞來昔布對(duì)人子宮內(nèi)膜腺癌抑制作用的研究.pdf

1、目的：探討COX-2選擇性抑制劑塞來昔布對(duì)人子宮內(nèi)膜腺癌的體外及體內(nèi)抑制作用及其相關(guān)機(jī)制，為治療子宮內(nèi)膜腺癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 一．體外試驗(yàn) 以不同濃度的塞來昔布（25-200umol/L）分別以不同時(shí)間處理體外培養(yǎng)的HEC-1B細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡，用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變，用Transwell小室測(cè)定細(xì)胞侵襲力，用RT-PCR檢測(cè)COX-2 mRNA的表達(dá)。

2、 二．體內(nèi)試驗(yàn) 1．30只裸鼠皮下注射HEC-1B細(xì)胞，建立人子宮內(nèi)膜癌裸鼠荷瘤模型。待成瘤后，裸鼠隨機(jī)分為對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組予生理鹽水口服2周,實(shí)驗(yàn)組分別予塞來昔布4mg/d和2mg/d口服2周。 2．從治療開始每3天計(jì)算瘤體積一次，描繪腫瘤生長(zhǎng)曲線；治療結(jié)束后處死裸鼠，剝出瘤組織稱重，計(jì)算抑瘤率，瘤組織標(biāo)本分別用RT-PCR檢測(cè)COX-2 mRNA的表達(dá),用免疫組化法檢測(cè)COX-2蛋白的表達(dá)和微血管密度（

3、MVD）。 結(jié)果： 1．MTT結(jié)果顯示塞來昔布對(duì)HEC-1B細(xì)胞的增殖具有抑制作用，且呈現(xiàn)時(shí)間和濃度依賴性；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示塞來昔布能使HEC-1B細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例增加，S期和G2/M期細(xì)胞比例減少，細(xì)胞的凋亡率增加，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；透射電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn)塞來昔布能使細(xì)胞出現(xiàn)凋亡的特征性改變，低濃度處理的細(xì)胞呈現(xiàn)空泡化的早期凋亡改變，高濃度則出現(xiàn)晚期凋亡的凋亡小體；隨著塞來昔布濃度的增加

4、（50-200umol/L），Transwell侵襲試驗(yàn)結(jié)果表明細(xì)胞穿膜數(shù)目逐漸減少， RT-PCR結(jié)果顯示COX-2 mRNA的表達(dá)逐漸減弱，與對(duì)照組相比均有顯著差異（P<0.05）。 2．塞來昔布對(duì)裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，且隨著藥物濃度的增加，抑瘤作用逐漸增強(qiáng)（抑瘤率分別為32.4％和48.6％）。同時(shí)隨著藥物濃度的增加，RT-PCR結(jié)果顯示移植瘤組織COX-2mRNA的表達(dá)逐漸減弱，免疫組化結(jié)果顯示移植瘤組