nHACP-CF材料與成骨細胞體外復合培養(yǎng)的實驗研究.pdf

1、目的：觀察甲殼素纖維(CF)增強多孔膠原基骨組織工程支架材料(nHACP/CF)對成骨細胞的附著、生長及增殖的影響，為骨組織工程支架材料的選擇提供實驗依據。 方法: 1、大鼠成骨細胞的原代分離、培養(yǎng)和鑒定采用酶消化法進行大鼠頭蓋骨成骨細胞的分離，差速粘附法進行細胞純化，常規(guī)條件下進行細胞的體外培養(yǎng)。取培養(yǎng)第3代細胞進行細胞表型鑒定。鑒定內容包括：細胞形態(tài)的觀察、堿性磷酸酶染色。 2、大鼠成骨細胞最佳接種濃度的測定

2、實驗采用6種濃度：10×10<'5>/ml，8×10<'5>/ml，6×10<'5>/ml，4×10<'5>/ml，2×10<'5>/ml，10<'5>/ml，然后將其分別接種到85％及90％孔隙率的nHACP/CF材料上，10天后測定各濃度下的ALP活性。 3、成骨細胞在nHACP/CF材料上附著的觀察將第3代大鼠成骨細胞以測得的最佳接種濃度分別接種到兩種孔隙率的nHACP/CF材料上，2天后通過掃描電鏡來觀察成骨細胞的情況。

3、 4、nHACP/CF材料對成骨細胞生長，增殖影響的檢測將第3代大鼠成骨細胞以最佳濃度分別接種到兩種孔隙率的nHACP/CF材料上作為實驗組，細胞單獨培養(yǎng)作為對照組，測定不同時間成骨細胞的MTT值和ALP·活性。 結果 1、大鼠成骨細胞具有典型的成骨細胞形態(tài)，堿性磷酸酶染色陽性。 2、細胞最佳接種濃度接種濃度提高時ALP活性也逐漸提高，但當濃度超6×10<'5>/ml時ALP活性反而下降。說明在本實驗中該

4、濃度與nHACP/CF材料復合培養(yǎng)后成骨能力最強。 3、成骨細胞的早期附著細胞/材料復合培養(yǎng)2天后，細胞在兩種孔隙率的nHACP/CF上形態(tài)舒展，伸展充分，有多個細胞突起，細胞向四周伸出偽足并跨越超微孔表面像孔內生長。 4、MTT和ALP活性細胞接種后實驗組和對照組隨時間延長細胞活性逐漸增加，2，6，10天時各組內相比未見顯著差異(P>0.05)，14天時實驗組明顯高于對照組(P<0.05)，但兩個實驗組之間無顯著差異(