細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴、囊壁蛋白質(zhì)組學(xué)的初步研究.pdf

1、目的：1.尋找出適用于研究細(xì)粒棘球蚴的蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，獲得較為理想的細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴、囊壁組織的雙向電泳圖譜。2、運(yùn)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）獲取各蛋白點(diǎn)的肽指紋圖譜（PMF）。3、利用生物信息學(xué)技術(shù)對原頭蚴、囊壁的蛋白質(zhì)組分進(jìn)行配比分析，了解細(xì)粒棘球蚴蛋白質(zhì)的構(gòu)成和種類，并將這些蛋白質(zhì)進(jìn)行功能劃分。最終，為抗包蟲病疫苗研究、早期診斷方法的研究和包蟲病新型藥物作用靶蛋白的篩選提供研究資料。

2、　　方法：采用研磨法處理各樣本組織，并用Bradford法對其進(jìn)行蛋白定量。按照樣品中各蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量大小的不同，將蛋白樣品進(jìn)行雙向電泳分離。然后利用凝膠成像掃描儀采集并保存雙向電泳圖像，并使用PDQuest軟件分析各蛋白點(diǎn)的相關(guān)數(shù)據(jù)。最后，將凝膠置于自動切膠儀中，通過軟件選取切割的目標(biāo)蛋白，切膠儀將自動切取、收集膠粒。膠粒需經(jīng)胰蛋白酶酶解處理后，使得蛋白裂解為多個肽段。再通過MALDI-TOF的檢測，獲得各蛋白的肽指紋圖譜（PM

3、F）數(shù)據(jù)。將該P(yáng)MF數(shù)據(jù)與各數(shù)據(jù)庫中的蛋白數(shù)據(jù)相配比，并初步鑒定各蛋白組分的性質(zhì)。
　　結(jié)果：1.在原頭蚴、囊壁組織的雙向電泳圖中，分別分離出233個和107個蛋白點(diǎn)。2.各蛋白點(diǎn)通過MALDI-TOF-MS檢測，原頭蚴和囊壁分別有106個蛋白點(diǎn)和42個蛋白點(diǎn)成功獲得肽指紋圖譜（PMF）。3.原頭蚴蛋白點(diǎn)中共有23個蛋白點(diǎn)得以初步鑒定，包括有：○1細(xì)胞骨架蛋白：肌動蛋白、原肌球蛋白、肌球蛋白、副肌球蛋白、動力蛋白激活蛋白?！?代謝

4、相關(guān)酶類：過氧化物還原酶、轉(zhuǎn)酮醇酶、磷脂酶A2、糖原合成酶?！?信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白：鈣結(jié)合蛋白、酪氨酸蛋白激酶、絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶?！?物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白：細(xì)胞色素C、ADP/ATP運(yùn)輸?shù)鞍?、脂肪酸結(jié)合蛋白；囊壁蛋白點(diǎn)中共有14個蛋白點(diǎn)得到初步鑒定，它們是：○1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白：鈣結(jié)合蛋白、酪氨酸蛋白激酶、絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶?！?代謝相關(guān)酶類：過氧化物還原酶、轉(zhuǎn)酮醇酶、磷脂酶A2?！?物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白：細(xì)胞色素P450、脂肪酸結(jié)合蛋白、載脂蛋白