戊型肝炎病毒ORF2基因分段克隆與序列分析.pdf

1、戊型肝炎(Hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus HEV)引起的急性自限性疾病.其臨床特征為通常表現(xiàn)是發(fā)熱、全身疲乏、食欲不振、厭油膩、惡心嘔吐、尿色深黃如濃茶、眼睛和皮膚發(fā)黃,肝功能檢查出現(xiàn)轉氨酶迅速升高到幾百甚至幾千單位,黃疸較常見,并可持續(xù)一周.在亞洲、非洲和美洲等發(fā)展中國家人群中發(fā)生比較普遍,在一些地區(qū)可占到急性病毒性肝炎的50﹪,是導致發(fā)病和病死的重要因素,尤其對孕婦可造成有20﹪的病死率

2、.對人類健康具有嚴重危害性.HEV是一種無包膜的正義單鏈RNA病毒,目前歸于嵌杯病毒科,直徑為27-32nm,基因組全長大約為7.5kb,具有3個互相重疊的開放閱讀框架即ORF1、ORF2和ORF3,并且5'一端有27個核苷酸的非編碼區(qū),3'一端為非結構區(qū),ORF1長約5kb,它主要編碼與HEV復制相關的非結構蛋白;ORF2長約2kb,編碼病毒衣殼蛋白,為主要的結構基因編碼區(qū).ORF3含有369個核苷酸,編碼產(chǎn)物為磷蛋白,與細胞的支架及

3、HEV特異性免疫活性有關.不同地區(qū)來源的HEV基因序列有一定的差異,但是同一地區(qū)來源的HEV的基因序列保持相對穩(wěn)定.隨著HEV不斷被分離,克隆和鑒定,根據(jù)各毒株核苷酸,氨基酸的同源性的大小以及系統(tǒng)進化樹的分析,全球的HEV至少有8個基因型.中國主要為1和4型,而且散發(fā)性戊型肝炎中以4型為主.在發(fā)展中國家主要引起病毒性肝炎的戊型肝炎病毒(HEV),已經(jīng)在北美和亞洲豬體內檢測出,關于是否能在人畜之間傳播引起了人們極大的關心.該研究對黑龍江省

4、一株豬糞便中的HEV的部分特性進行研究,根據(jù)已知序列設計了5組兼并引物,采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測豬糞便中的HEV RNA,分段的將PCR陽性產(chǎn)物的ORF2片斷基因進行了克隆測序,并與已知入的HEV和豬的HEV進行了序列比較分析.結果該株序列ORF2區(qū)與已知人的1,2,3,4型HEV ORF2區(qū)的同源率為59.6﹪、56.8﹪、59.6﹪、74.4﹪.與美國豬和日本豬的HEV的同源率只用有57.7﹪.說明該株豬源的HE