EGCG通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡途徑減輕順鉑腎毒性.pdf

1、研究背景及目的：
　　順鉑(Cisplatin，CP)是一種有效的化療藥物，被廣泛應(yīng)用于多種實(shí)體腫瘤的治療，如卵巢癌、睪丸癌、子宮頸癌、肺癌以及頭頸部的鱗狀細(xì)胞癌等。臨床上，CP的大劑量應(yīng)用產(chǎn)生的副作用主要包括骨髓抑制、神經(jīng)毒性、耳毒性以及腎毒性等，其中腎毒性嚴(yán)重限制其臨床應(yīng)用。CP可引起腎小管功能紊亂并導(dǎo)致急性腎功能衰竭，發(fā)生率約為20-30％。CP引起腎小管上皮細(xì)胞損傷的機(jī)制主要包括氧化應(yīng)激、炎癥、細(xì)胞壞死或凋亡以及腎臟血供減

2、少所引起的氧供不足，其中腎小管上皮細(xì)胞的凋亡在CP腎毒性發(fā)生機(jī)制中扮演重要的角色。腎小管上皮細(xì)胞凋亡途徑包括:死亡受體介導(dǎo)的外源性凋亡途徑、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑、線粒體凋亡途徑。近年來(lái)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum，ER)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡途徑越來(lái)越受到大家的關(guān)注。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是從綠茶中提取的茶多酚，是綠茶的主要活性成分，具有抗凋亡、抗氧化、抗

3、炎等特性，可用于多種疾病的預(yù)防，但EGCG對(duì)CP腎毒性的保護(hù)作用和機(jī)制仍未完全明確。本實(shí)驗(yàn)采用EGCG干預(yù)CP所引起的小鼠急性腎損害模型，通過(guò)比較干預(yù)藥物使用前后腎功能生化指標(biāo)、腎小管上皮細(xì)胞病理形態(tài)改變及腎小管上皮細(xì)胞的凋亡情況，同時(shí)檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡通路中的標(biāo)志蛋白分子半胱氨酸天冬氨酸酶12(Cysteine aspartase-specific proteases12，caspase-12)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose r

4、egulating protein78，GRP78)的表達(dá)情況，旨在研究EGCG能否減輕CP腎毒性以及探索EGCG腎臟保護(hù)的作用機(jī)制。
　　研究方法：
　　將28只雄性C57/BL6小鼠隨機(jī)分為四組:(1)對(duì)照組(N，n=7):給予該組小鼠一次性腹腔注射生理鹽水，注射量為10ml/kg;(2) EGCG組(E，n=7):給予該組小鼠一次性腹腔注射EGCG，注射量為100mg/kg（EGCG溶解于生理鹽水，稀釋濃度為10mg/

5、ml）;(3) CP急性腎損傷組(C，n=7):給予該組小鼠一次性腹腔注射CP，注射量為20mg/kg（CP溶于生理鹽水，稀釋濃度為2mg/ml）;(4) CP+EGCG干預(yù)組(C+E，n=7):該組小鼠在接受腹腔注射CP20mg/kg前30分鐘行腹腔注射EGCG100mg/kg預(yù)處理，48小時(shí)后再次給予腹腔注射EGCG100mg/kg。在首次注射藥物5天后將小鼠處死、稱重并留取腎組織及血清，測(cè)量小鼠腎功能指標(biāo)血清肌酐(serum cr

6、eatinine，Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)，計(jì)算小鼠腎臟系數(shù)（renal index，RI），行PAS染色觀察腎小管上皮細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)改變，TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況，免疫組化、蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑中標(biāo)志性蛋白（GRP78，caspase-12）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠腎功能及腎臟系數(shù)改變:與對(duì)照組相比，CP急性腎損傷組Scr、BUN、R

7、I顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與CP急性腎損傷組比較，CP+EGCG干預(yù)組小鼠Scr、BUN、RI顯著降低(P＜0.05)。（表一）
　　2.小鼠腎組織病理改變:對(duì)照組和EGCG組腎小管結(jié)構(gòu)正常，CP急性腎損傷組腎小管上皮細(xì)胞空泡樣變、腫脹、細(xì)胞壞死、腎小管內(nèi)可見(jiàn)大量管型。與CP急性腎損傷組相比，CP+EGCG干預(yù)組腎組織病理?yè)p傷明顯減輕(P＜0.05)。（圖一）
　　3.小鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況:CP急性

8、腎損傷組的腎小管上皮細(xì)胞凋亡數(shù)目較對(duì)照組明顯增加（P＜0.05），而CP+EGCG干預(yù)組腎小管上皮細(xì)胞凋亡數(shù)目較CP急性腎損傷組明顯減少（P＜0.05），對(duì)照組和EGCG組僅有散在少量細(xì)胞凋亡。（圖二）
　　4.小鼠腎組織內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑標(biāo)志蛋白的表達(dá):與對(duì)照組相比，CP急性腎損傷組GRP78、caspase-12蛋白表達(dá)水平上調(diào)（P＜0.05）。CP+EGCG干預(yù)組小鼠組織內(nèi)GRP78、caspase-12蛋白表達(dá)量較CP急性腎