人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞初步研究.pdf

1、目的：從人腦膠質(zhì)瘤體外細(xì)胞系和膠質(zhì)瘤組織中分離鑒定腫瘤干細(xì)胞，為進(jìn)一步研究其生物學(xué)特性奠基。 方法：1、將SHG44細(xì)胞系和SHG44-9細(xì)胞株，分別應(yīng)用含血清培養(yǎng)基(DMEM+10％FCS)和無血清培養(yǎng)基(DMEM/F12，添加bFGF、LIF和EGF)培養(yǎng)。用CD133免疫磁珠分離干細(xì)胞、流式細(xì)胞儀檢測(cè)Hoechst33342和Nestin陽性細(xì)胞、免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞及其分化細(xì)胞中的Nestin、NSE、GFA

2、P陽性細(xì)胞。2、采集8例人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本，原代培養(yǎng)形成腫瘤球，經(jīng)免疫磁珠分離獲取CD133+細(xì)胞，用有限稀釋法在含細(xì)胞因子組合的無血清培養(yǎng)基中得到腫瘤細(xì)胞球后傳代。取第5代腫瘤干細(xì)胞，用含10％FBS培養(yǎng)液誘導(dǎo)分化。分化前后用Nestin、NSE、GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞及其分化細(xì)胞的相應(yīng)標(biāo)志物。 結(jié)果：1、CD133磁珠分離得到的干細(xì)胞的比例：在血清組SHG44和SHG44-9分別為0.021％和0.035％

3、；無血清組分別為1.2％和2.3％。而Hoechst33342和CD133標(biāo)記后流式細(xì)胞儀檢測(cè)干細(xì)胞比例：血清組中SHG44、SHG44-9分別為1.5％、0.37％；無血清組分別為16.4％和29.1％。并且這些細(xì)胞能夠增殖和分化成神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。而Nestin標(biāo)記后SHG44、SHG44-9中分別有51.05％、77.53％陽性細(xì)胞。2、在1例間變性室管膜瘤標(biāo)本中克隆到了CD133+細(xì)胞，這些細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)能長(zhǎng)期維持呈球形生長(zhǎng)(