應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選和鑒定卵巢癌腫瘤抗原.pdf

1、卵巢癌是惡性腫瘤中導(dǎo)致婦女死亡的主要原因，早期診斷卵巢癌可對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生影響，故腫瘤抗原的篩選在卵巢癌的早期診斷中顯得尤為重要，并可為卵巢癌免疫治療提供新的治療靶點(diǎn)及新的疫苗設(shè)計(jì)方案。蛋白質(zhì)組(proteome)的概念于1995年提出后，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)就迅速成為了生命科學(xué)研究的一個(gè)新前沿，相應(yīng)的技術(shù)也在迅猛發(fā)展并在各個(gè)研究領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。在腫瘤抗原篩選方面，噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)、核糖體展示技術(shù)和血清學(xué)篩選重組cDN

2、A表達(dá)文庫(kù)(SEREX)技術(shù)等作為常用的方法已得到廣泛應(yīng)用。本研究旨在將蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)應(yīng)用到卵巢癌腫瘤抗原的篩選中，創(chuàng)建一種新的篩選腫瘤抗原方法和技術(shù)路線。 方法：收集初治的卵巢癌患者血清，應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡(Westernblot)技術(shù)對(duì)卵巢癌患者血清進(jìn)行初步對(duì)比分析，篩選出免疫反應(yīng)強(qiáng)烈、差異顯著的患者血清，利用該患者血清與人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3裂解物反應(yīng)，采用免疫沉淀(immunoprecipitation，IP)技術(shù)富集抗原

3、、聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，與正常對(duì)照血清的免疫沉淀樣品進(jìn)行對(duì)比分析，獲得差異蛋白條帶，然后對(duì)差異蛋白條帶進(jìn)行質(zhì)譜(massspectrometry，MS)鑒定和生物信息學(xué)分析。 結(jié)果：采用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)篩選到兩個(gè)差異顯著的卵巢癌患者血清，經(jīng)免疫沉淀、聚丙烯酰胺凝膠電泳與正常血清免疫沉淀樣品比較，發(fā)現(xiàn)在接近66kDa及42kDa的位置處有差異蛋白條帶，經(jīng)質(zhì)譜鑒定、生物信息學(xué)分析得到四個(gè)蛋白質(zhì)：熱休克蛋白70(heatshockp