剪切力對豚鼠耳蝸微血管內(nèi)皮細胞的影響.pdf

1、一、目的:觀察體外培養(yǎng)的豚鼠耳蝸微血管內(nèi)皮細胞在不同剪切力作用后的形態(tài)學改變及其可能的改變機理,進一步豐富血迷路屏障通透性調(diào)控機理.二、方法:1.通過體外培養(yǎng)的方法,獲取單層融合的豚鼠耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細胞,豚鼠腦微血管內(nèi)皮細胞以及人臍V內(nèi)皮ECV-304的單層融合狀態(tài).2.設計一套由驅(qū)動恒流泵、蠕動泵、儲液器及若干導管組成的流體力學灌流系統(tǒng),通過控制流量產(chǎn)生不同力量對上述培養(yǎng)好的細胞施加剪切作用.3.對于豚鼠耳蝸微血管內(nèi)皮細胞我們設

2、計τ=0.883dyn/cm<'2>、0.976dyn/cm<'2>、1.184dyn/cm<'2>、2.929dyn/cm<'2>,四個剪切力,在0h、0.5h、1h、2h、4h、8h、16h、24h 8個時相點用倒置相差顯微鏡對受到剪切力作用后的細胞進行形態(tài)學觀察,在對應時相點對細胞形態(tài)進行照相,用Tiger圖像分析儀進行形狀參數(shù)Pyx和Q的測定.同樣,對腦微血管內(nèi)皮細胞設計剪切力大小為0.276dyn/cm<'2>、0.476dy

3、n/cm<'2>、1.069dyn/cm<'2>,對ECV-304細胞設計剪切力大小為5dyn/cm<'2>,觀察時相點及內(nèi)容同耳蝸微血管內(nèi)皮細胞,把各個觀測點的數(shù)據(jù)繪制成表,并進行統(tǒng)計學分析得出相應的結(jié)果,以研究各個剪切力對不同細胞的形態(tài)學影響及其與時間的關(guān)系,并繪制成曲線圖.4.剪切過后的耳蝸微血管內(nèi)皮細胞用phalloidin進行固定染色,對F-actin進行激光共聚焦熒光染色觀察,繪制成不同剪切力下F-actin熒光含量表,并繪