人ERCC1基因的克隆、表達(dá)及功能的初步研究.pdf

1、腦是體內(nèi)氧代謝率最高的器官,在正常的生理狀態(tài)下產(chǎn)生大量的DNA損傷.損傷的DNA可以引起基因突變和細(xì)胞周期停滯,最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和細(xì)胞凋亡.因此及時高效的DNA修復(fù)系統(tǒng)在維持基因組的穩(wěn)定性和細(xì)胞的正常生理功能中起了關(guān)鍵的作用.ERCC1作為一種重要的核苷酸剪切修復(fù)因子參與了多種損傷DNA的修復(fù)過程.為了進(jìn)一步了解ERCC1蛋白的功能,實驗首先克隆了人的ERCC1基因,經(jīng)測序分析后與公開發(fā)表的序列基因一致.隨后構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX

2、-4T-1-ERCC1和真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N1-ERCC1,并分別在大腸桿菌BL21和PC12細(xì)胞上實現(xiàn)了外源性ERCC1基因的表達(dá).其后在腦缺血后的大鼠側(cè)腦室內(nèi)微量注射pEGFP-N1-ERCC1質(zhì)粒,在缺血再灌3天后觀察到EGFP-ERCC1融合蛋白在大鼠腦同的高表達(dá).小結(jié):該實驗成功克隆了人類的ERCC1基因,構(gòu)建了真核表達(dá)載體,并在大鼠腦內(nèi)有效地表達(dá)了外源性ERCC1蛋白.實驗發(fā)現(xiàn)ERCC1表達(dá)下降與衰老密切相關(guān),同時腦缺