整合子介導的豬源正常菌群大腸桿菌耐藥性研究.pdf

1、大腸桿菌除小部分可致病外,大部分是動物腸道內(nèi)正常菌群的成分之一,屬非致病性細菌。臨床應(yīng)用抗菌藥物雖對細菌性感染的防控起到了積極作用,但隨著抗菌藥物的大量和不合理應(yīng)用,病原細菌耐藥性問題越來越突出,已成為全世界的一個難題。同時,另一個尖銳問題就是由于細菌長期處于抗菌藥物選擇壓力下,非致病細菌如腸道正常菌群大腸桿菌的耐藥和多重耐藥問題也日益加劇。
　　 采取浙江省規(guī)?；i場健康仔豬直腸棉拭子或新鮮糞樣,經(jīng)細菌分離純化、革蘭氏染色、生

2、化試驗和小鼠致病性試驗等,鑒定得到43株正常菌群大腸桿菌。通過WHO推薦的K-B法測定其對17種抗菌藥物的耐藥性。結(jié)果表明,在17種抗菌藥物中,細菌對青霉素G、氨芐青霉素、羧芐青霉素、復方新諾明、鏈霉素表現(xiàn)出很高的耐藥性,耐藥率分別為95.3％、76.7％、76.2％、74.4％和60.5％。進一步的耐藥譜分析表明,43株正常菌群大腸桿菌菌株均對1種或多種抗菌藥物耐藥:對1～3種抗菌藥物耐藥的有8株,對4～6種和7～9種抗菌藥物耐藥的均

3、有15株,對10～11種抗菌藥物耐藥的有5株,其中對5種抗菌藥物耐藥的菌株所占比例最高,達25.6％,其次是對7種抗菌藥物耐藥的菌株有9株,占20.9％。
　　 Touch-down PCR擴增正常菌群大腸桿菌分離株中sul基因、aada基因、gyrA基因和tetC基因,結(jié)果表明,在43株正常菌群大腸桿菌分離株中,有8株檢測出sul耐藥基因,7株檢測出aada耐藥基因,分別占檢測菌株的18.6％(8/43)和16.3％(7/43

4、)。隨機抽檢28株分離菌gyrA基因和tctC基因攜帶率,結(jié)果表明其中含gyrA基因的菌株共有11株,攜帶率為39％,但未檢測到tetC基因。相對于耐藥表型,耐sul、aada、gyrA和tetC耐藥基因在43株正常菌群大腸桿菌分離株中陽性率的檢測偏低,提示除這些基因外,還有其他基因或因素在大腸桿菌對抗菌藥物的耐藥及多重耐藥中起重要作用。
　　 對Ⅰ型、Ⅱ型整合酶基因通過PCR體外擴增并經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析,結(jié)果表明43株正常菌

5、群大腸桿菌有27株檢測到Ⅰ型整合酶基因,2株檢測到Ⅱ型整合酶基因,分別占檢測菌株數(shù)的62.8％和4.7％,所有Ⅰ型整合酶陽性菌株均呈多重耐藥,最主要多重耐藥類型為氨芐青霉素+復方新諾明+羧芐青霉素等;另外,所有檢測到Ⅱ型整合酶基因的菌株也同時檢測到了Ⅰ型整合酶基因,符合率為100％,說明1株細菌可同時攜帶多個整合子,且菌株攜帶Ⅰ型整合酶基因和Ⅱ型整合酶基因有一定相關(guān)性。
　　 經(jīng)PCR體外擴增、瓊脂糖凝膠電泳分析,43株大腸桿菌

6、有7株為Ⅰ型整合子基因盒陽性菌,陽性率為16.2％;對整合子基因盒進一步的DNA序列分析結(jié)果表明,基因盒大小共3種,其中含230bp的有1株,含1025bp的有3株,含1602bp的也有3株,插入片斷多含aadA基因和dfrA基因,分別編碼對鏈霉素和磺胺類藥物的耐藥性。耐藥基因型分析結(jié)果提示正常菌群大腸桿菌對鏈霉素和磺胺類藥物耐藥最為常見,這與耐藥表型的檢測結(jié)果基本符合。
　　 本研究結(jié)果表明,浙江省規(guī)模化豬場正常菌群大腸桿菌Ⅰ