膽紅素對大鼠頸上交感神經節(jié)細胞乙酰膽堿受體通道電流的影響及其機制.pdf

1、目的：重度黃疸患者交感神經興奮性降低，并且自主神經功能下降與血漿膽紅素濃度相關。交感神經通過突觸前釋放乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)作用于突觸后煙堿型乙酰膽堿受體(nicotinicacetylcholinereceptors，nAChRs)通道調控節(jié)后纖維末端的遞質（兒茶酚胺）釋放，從而調節(jié)心血管系統(tǒng)功能。頸上交感神經節(jié)(superiorcervicalganglia，SCG)細胞上的nAChRs在突觸信息的加工、處理

2、和傳遞過程中起重要作用。因此我們研究膽紅素對SCG上nAChRs通道電流的影響以闡明黃疸患者自主神經功能降低的機制。
　　 方法：將SD大鼠(5-12d)斷頭，快速取出SCG，放入含Ⅰ型膠原酶、蛋白酶E和脫氧核糖核酸酶的氧飽和的31.5℃孵育液中消化25-40min，之后用吸管將消化好的神經元細胞打散，獲取單個神經元細胞，將其放置培養(yǎng)皿30min，灌流液沖洗后行膜片鉗實驗。所有的電生理測量均在室溫(22-25℃)下通過全細胞膜片

3、鉗記錄模式進行，玻璃電極采用P-97微電極拉制儀四部法拉制而成。利用微操縱儀將玻璃電極放置在神經元上，當封接阻抗大于1GΩ時吸破電極腔內細胞膜，形成全細胞封接，補償電阻。給與鉗制電壓-60mV，濾波1KHz，記錄乙酰膽堿受體通道電流。不同濃度的ACh和膽紅素等通過自制Y型快速加藥系統(tǒng)于細胞旁給藥。實驗所用灌流液中含有1umol/L阿托品，以阻止毒蕈堿受體的活化。數據采用PatchMaster和Origin8.0軟件進行分析。結果以均數±

4、標準差（x±s）表示，配對資料t檢驗，p＜0.05為有統(tǒng)計學差異。
　　 結果：在鉗制電壓-60mV下，ACh濃度依賴性的誘發(fā)一快速激活且快速衰減的內向電流即乙酰膽堿受體電流(ACh-inducedcurrents，IACh)。低濃度(0.5μmol/L)膽紅素使100μmol/L的ACh誘發(fā)的IACh增加1.13(P＜0.05)倍，脫敏感衰減率降低8.63％(P>＞0.05)；而高濃度(5.0μmol/L)膽紅素使100μmo

5、l/L的ACh誘發(fā)的IACh分別降低72.61%(P＜0.05)，脫敏感衰減率分別降低96.49%(P＜0.05)。4μM膽紅素干預下，100、200、400、800μM的ACh誘發(fā)電流的波幅分別為635.37±172.72、1669.67±177.02、4370.86±206.25和6916.9±73.66(pA)。Forskolin（PKA活化劑）使100μMACh誘發(fā)的相對IACh波幅由0.44±0.11降低到0.30±0.96(

6、p＜0.05)，相對脫敏感衰減率由0.05±0.07增加到0.30±0.29(p＜0.05)；而H-89（PKA抑制劑）使100μMACh誘發(fā)的相對IACh峰值由0.38±0.05增加到0.43±0.08(p＞0.05)，相對脫敏感衰減率由0.004±0.002增加到0.014±0.003(p＞0.05)。
　　 結論：膽紅素以可逆性恢復的方式影響SCG細胞IACh。低濃度膽紅素明顯增強IACh，其機制可能與降低其通道脫敏感衰減