ZAG基因多態(tài)性與超重肥胖的相關(guān)性研究.pdf

1、一、研究背景和目的:
　　 隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，肥胖(Obesity)在全球的發(fā)病率正在逐年上升。肥胖是2型糖尿病、高血壓、高血脂、冠心病等疾病的主要危險(xiǎn)因素，已成為威脅人類(lèi)健康的常見(jiàn)疾病。單純性肥胖是一個(gè)多因素疾病，遺傳因素在肥胖的發(fā)生中起著重要的作用。ZAG是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新的脂肪動(dòng)員因子。在體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中均證實(shí)ZAG能促進(jìn)脂肪分解、減輕體重，但是在人類(lèi)其基因多態(tài)性，如單核苷酸多態(tài)性(single nucleotid

2、e polymorphism，SNP)與肥胖癥相關(guān)性方面的大樣本研究目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。本研究的主要目的是研究中國(guó)北京地區(qū)漢族人群中ZAG基因的SNP與肥胖癥的相關(guān)性。
　　 二、研究方法:
　　 1、臨床樣本和臨床資料的采集:
　　 研究對(duì)象來(lái)自北京平谷地區(qū)和協(xié)和醫(yī)院體檢中心。采用“病例一對(duì)照”的研究方法，建立肥胖/超重組和健康對(duì)照組兩組研究人群，收集其臨床資料和生化指標(biāo)，包括患者的一般資料、既往病史、疾病家族

3、史、人體測(cè)量指數(shù)和生化指標(biāo)，并按照以下的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，收集573名超重或肥胖患者和304名健康人。
　　 1)超重/肥胖組
　　 ·納入標(biāo)準(zhǔn):
　　 ①查體:BMI≥25.0 kg/m2，
　　 ②生化指標(biāo):FBG<5.6mmol/L，ALT<100U/L(2.5倍正常值)，AST<92U/L(2.5倍正常值)，Cr<132umol/L、BUN<7.14mmol/L。
　　 ·排除標(biāo)準(zhǔn):

4、　　 ①既往肝病史及慢性及惡性腫瘤病史；
　　 ②任何一點(diǎn)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)。
　　 2)健康對(duì)照組
　　 ·納入標(biāo)準(zhǔn):
　　 ①查體:BMI<25.0 kg/m2，
　　 ②生化指標(biāo):FBG<5.6mmol/L，ALT<100U/L(2.5倍正常值)，AST<92U/L(2.5倍正常值)，Cr<132umol/L、BUN<7.14mmol/L，TC<5.69 mmol/L、TG<1.69 mmol

5、/L、LDL-C<3.62 mmol/L、HDL-C>0.92 mmol/L
　　 ·排除標(biāo)準(zhǔn):
　　 ①既往肝病史及慢性及惡性腫瘤病史；
　　 ②任何一點(diǎn)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)。
　　 2、ZAG基因SNP的選擇
　　 本研究SNP的選擇基于以下3個(gè)方面:①Hapmap上提供的中國(guó)北京漢族人群(China Bejing Han，CBH)的關(guān)于ZAG基因的遺傳多態(tài)性位點(diǎn)的信息，在ZAG基因區(qū)域上選擇出基于

6、中國(guó)漢族人群的標(biāo)簽SNP。②隨機(jī)挑選30名正常人，對(duì)ZAG基因的4個(gè)外顯子及5’啟動(dòng)密碼子(strat codon)上游1.5kb和3’終止密碼子(stop codon)下游0.9kb的DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序，尋找待測(cè)定SNP位點(diǎn)，要求MAF≥5％。③同時(shí)兼顧國(guó)外在ZAG基因多態(tài)性與肥胖癥上研究篩選到的陽(yáng)性位點(diǎn)。通過(guò)以上方法我們從中選擇5個(gè)待檢測(cè)的SNP位點(diǎn):rs2247607(A>T)、rs4727442(G>T)、rs4215(A

7、>G)、rs2527923(C>T)和rs2527882(C>T)。
　　 3、ZAG基因SNP的檢測(cè)
　　 1) rs2247607位點(diǎn)堿基為A的序列可被限制性?xún)?nèi)切酶Spe I的識(shí)別并切割，在堿基A→T的變化后，則失去了酶切位點(diǎn)，因此采用限制性?xún)?nèi)切酶酶切法測(cè)定SNP位點(diǎn)的基因型。
　　 2)用TaqMan探針技術(shù)對(duì)rs4727442、rs4215、rs2527923、rs2527882進(jìn)行SNP檢測(cè)。
　

8、　 三、研究結(jié)果：
　　 1、一般資料:超重/肥胖組和健康對(duì)照組間年齡、身高、體重、BMI、腰圍、體脂、血壓、空腹血糖、UA、TC、TG、HDL-C、LDL-C的比較發(fā)現(xiàn):與健康對(duì)照組相比，超重/肥胖組的年齡、體重、BMI、腰圍、體脂、血壓、空腹血糖、UA、TC、TG、HDL-C、LDL-C均較高，P值均小于0.01，差異呈極顯著性，符合本研究分組的結(jié)果。
　　 2、總樣本、超重/肥胖組以及健康對(duì)照組中，ZAG基因各S

9、NP位點(diǎn)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)的P值均>0.05，均符合Hardy-Weinberg平衡，說(shuō)明本研究的研究對(duì)象能代表總體人群。
　　 3、等位基因的“病例-對(duì)照”關(guān)聯(lián)分析:ZAG基因的rs2247607、rs4727442、rs4215、rs2527923、rs2527882位點(diǎn)等位基因分布頻率在超重/肥胖組和健康對(duì)照組之間比較，P值分別為0.303、0.906、0.763、0.795、0.778，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

10、
　　 4、基因型的“病例-對(duì)照”關(guān)聯(lián)分析:超重/肥胖組和健康對(duì)照組之間ZAG基因各SNP位點(diǎn)基因型分布頻率比較，P值分別為0.582、0.217、0.369、0.938、0.942，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 5、顯隱性模型中基因型的“病例-對(duì)照”關(guān)聯(lián)分析:在顯性模型中，ZAG基因各SNP位點(diǎn)的基因型頻率在超重/肥胖組和健康對(duì)照組兩組之間比較，P值分別為0.727、0.390、0.387、0.892、0.860，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

11、差異。而在隱性模型中，兩組之間ZAG基因各SNP位點(diǎn)的基因型頻率比較，P值分別為0.299、0.244、0.440、0.721、0.737，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 6、單倍體型的“病例-對(duì)照”關(guān)聯(lián)分析:用Haploview4.1軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，rs2527882與rs2527923在同一個(gè)連鎖不平衡區(qū)內(nèi)，而rs4215、rs4727442和rs2247607在另一個(gè)連鎖不平衡區(qū)內(nèi)，從而可構(gòu)建兩組單倍體CC、TT和ATT、GG

12、T、GGA。超重/肥胖組和健康對(duì)照組間單倍體型CC、TT和ATT、GGT、GGA分布頻率比較，P值分別為0.749、0.714、0.934、0.443、0.365，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 7、各基因型間臨床生化指標(biāo)比較:ZAG基因各SNP的基因型間年齡、性別、身高、BMI、腰圍、體脂、舒張壓、空腹血糖、UA、TC、TG、HDL-C、LDL-C比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。rs4215、rs2527923、rs2527882的基因型間收縮壓

13、比較，P值分別為0.013、0.004、0.003，差異呈顯著性。體重在rs4215的GG、AG+AA基因型間以及rs4727442的GG、GT+TT基因型間比較，P值分別為0.026、0.028，差異呈顯著性。
　　 四、結(jié)論：
　　 1、中國(guó)北京地區(qū)漢族人群中ZAG基因的rs2247607、rs4727442、rs4215、rs2527923和rs2527882與肥胖癥進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究，發(fā)現(xiàn)ZAG基因的各SNP與肥胖癥可