F蛋白誘導(dǎo)原位肝移植大鼠免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：尋找肝臟F蛋白誘導(dǎo)免疫耐受的新靶標(biāo)，探討肝移植免疫耐受的可能機(jī)制，為人類肝移植特異性免疫耐受的成功誘導(dǎo)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。
　　方法：留取空白對照組(未經(jīng)原位肝移植的Wistar大鼠，立即處死，n=6)、免疫排斥組(移植術(shù)后7d，Wistar→SD，n=6)和免疫耐受組(術(shù)前1周胸腺內(nèi)注射供體源性F蛋白0.4mg，移植后100d，Wistar→SD，n=6)受體大鼠的肝臟組織，Trizol法提取肝組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄PC

2、R合成cDNA，采用熒光定量PCR技術(shù)檢測移植肝臟內(nèi)FLJ11565、MGC45806、DKFZp434K1210、F蛋白基因等免疫耐受相關(guān)基因的表達(dá)水平；采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法檢測移植大鼠肝組織浸潤淋巴細(xì)胞的凋亡情況；利用氨基酸分析技術(shù)和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析肝臟勻漿液的氨基酸、中小分子代謝物等代謝組學(xué)的變化。
　　結(jié)果：1、排斥組的免疫耐受相關(guān)基因表達(dá)水平較空白組低，耐受組的目的基因表達(dá)水平遠(yuǎn)高于排斥組，且

3、較空白組有所升高(P<0.05)。2、空白組、排斥組和耐受組浸潤淋巴細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為(8.83±0.43)％、(11.32±1.29)％和(19.00±1.96)％，任意兩組的凋亡指數(shù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。3、與排斥組相比，耐受組的?；撬?、谷氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、賴氨酸和色氨酸含量明顯降低(P<0.05)，甘氨酸含量明顯升高(P<0.05)；移植肝臟代謝輪廓分析篩選出有意義的特征離子47個(gè)，其中排斥組和耐受組均升高的離子5

4、個(gè)，耐受組較正常組和排斥組升高的離子2個(gè)，降低的離子2個(gè)。經(jīng)HMDB數(shù)據(jù)庫搜索和結(jié)構(gòu)推導(dǎo)初步鑒定出不同代謝物18種，包括D-塔格糖、尿刊酸、本膽烷醇酮等。
　　結(jié)論：FLJ11565、MGC45806、DKFZp434K1210和F蛋白基因在調(diào)節(jié)特異性免疫耐受的過程中可能起著重要作用；移植物中浸潤淋巴細(xì)胞的細(xì)胞凋亡分析有助于直觀判斷移植物處于排斥或耐受狀態(tài)，移植物中浸潤淋巴細(xì)胞的凋亡有助于誘導(dǎo)移植物免疫耐受；谷氨酰胺、甘氨酸和甲硫