植物病原菌拮抗微生物的篩選、鑒定及拮抗機(jī)理研究.pdf

1、本研究用稀釋分離法對成都、簡陽、雅安等地區(qū)的農(nóng)田、自然保護(hù)區(qū)的13個土壤樣品進(jìn)行放線菌和細(xì)菌的分離,共分離到放線菌119株,細(xì)菌67株.以玉米彎孢菌為供試菌,采用傳統(tǒng)五點對峙法和改良的點對峙培養(yǎng)篩選法對80株放線菌進(jìn)行篩選,結(jié)果顯示,前者在同步培養(yǎng)5天時間篩選出具有拮抗活性放線菌14株,后者在同步培養(yǎng)5天時間篩選出具有拮抗活性放線菌21株,由此確定改良點對峙培養(yǎng)篩選法適宜病原真菌拮抗性放線菌的篩選.由于拮抗菌BS04對病原真菌和細(xì)菌都具

2、有很好的拮抗作用,具有作為生防制劑的潛力,故對其進(jìn)行了深入的研究.通過正交設(shè)計試驗,優(yōu)化了多粘類芽孢桿菌BS04發(fā)酵產(chǎn)拮抗物質(zhì)的試驗條件.確定了BS04最佳發(fā)酵條件,培養(yǎng)基組成(g/L)為葡萄糖10,糊精7.5,氯化鈉5,玉米漿15,大豆粉30,碳酸鈣3,自然pH,發(fā)酵接種量為30ml發(fā)酵液接種1.5ml種子液(10<'8>cfu/ml含菌量),28℃培養(yǎng)2天(140r/min).以青枯假單胞菌為供試菌,采用改良的瓊脂孔擴(kuò)散法來進(jìn)行生物

3、跟蹤,對多粘類芽孢桿菌BS04拮抗成分進(jìn)行了分離純化.通過對BS04產(chǎn)酶能力的研究發(fā)現(xiàn),BS04雖然沒有幾丁質(zhì)酶活性,但是具有纖維素酶和蛋白酶活性,這就說明其產(chǎn)生的纖維素酶和蛋白酶在抗真菌上發(fā)揮了一定的作用,當(dāng)然,這并不排除除降解纖維素和蛋白質(zhì)以外的其他酶或未知拮抗成分也在拮抗過程中發(fā)揮著作用.通過顯微觀察,BS04代謝產(chǎn)物的拮抗成分可能是破壞了青枯假單胞菌的細(xì)胞膜,致使胞內(nèi)物外溢,菌體最后發(fā)生死亡.BS04作用于真菌,使真菌發(fā)生菌絲斷