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文檔簡介
1、目的：觀察Daxx（Fas death domain-associated protein）功能片段和Daxx全長的真核表達(dá)載體對(duì)細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量的影響并探討其機(jī)制。為防治高脂血癥以及由其引發(fā)的急性冠脈事件尋求新途徑。
方法：將帶有Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白功能片段(pCDNA3.1（+）/Daxx/DM(626-740))和Daxx全長的真核表達(dá)載體(pCDNA3.1（+）/Daxx)分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞。RT-PCR和
2、Western Blot方法分別鑒定穩(wěn)定細(xì)胞株是否建立成功。酶熒光法和HPLC（High Performance Liquid Chromatography）法觀察細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量變化；激光共聚焦法檢測Daxx與雄激素受體（androgen receptor, AR）的結(jié)合情況；RT-PCR和Western Blot方法檢測細(xì)胞中SREBP裂解活化蛋白（SREBP cleavage-activating protein,SCAP）和膽固
3、醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（sterol regulatory element binding proteins, SREBP）的mRNA和蛋白表達(dá)情況。
結(jié)果：pCDNA3.1（+）/Daxx/DM(626-740)和 pCDNA3.1（+）/Daxx穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后，激光共聚焦結(jié)果顯示Daxx與AR在胞漿胞核中的表達(dá)和共定位均增強(qiáng)；酶熒光法和HPLC法觀察到細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量降低；RT-PCR和Western Blot法檢測
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