鼻咽癌細胞系蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、鼻咽癌是在東南亞地區(qū)和我國南部廣泛流行的一種惡性腫瘤，本研究采用蛋白質(zhì)組學的研究手段對鼻咽癌細胞系作了一系列的研究，共分為三個部分： 第一部分，采用了雙向電泳，PDQuest軟件分析和基質(zhì)輔助激光解析串聯(lián)質(zhì)譜的技術路線，分析了鼻咽癌細胞系和正常的鼻咽上皮細胞系之間的蛋白質(zhì)組學的差異。共鑒定了15個在腫瘤細胞中上調(diào)和18個在腫瘤細胞表達下調(diào)的蛋白質(zhì)，并對其中的兩個蛋白質(zhì)annexinAl和nm23H1進行了免疫印跡的驗證。這些表達

2、差異的蛋白質(zhì)與細胞的增殖和調(diào)亡、癌癥的轉(zhuǎn)移，細胞骨架，信號傳導等有關。本實驗的研究結(jié)果為研究鼻咽癌的癌癥發(fā)生機理的研究提供了幫助。 第二部分，以鼻咽癌細胞系HNE1質(zhì)膜為研究對象，分成三部分研究細胞表面蛋白質(zhì)： (1) 通過0.1M Na<,2>CO<,3>、水和生物素處理細胞表面富集到細胞外周蛋白質(zhì)，(2) 通過Percoll密度梯度超速離心得到全質(zhì)膜，(3) 對細胞勻漿液用0.1M Na<,2>CO<,3>溶液處理后再進行P

3、ercoll密度梯度超速離心得到整合質(zhì)膜蛋白質(zhì)。對這三種方法提取的細胞表面蛋白質(zhì)通過一維SDS-PAGE結(jié)合電噴霧四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-Q-TOF)，雙向凝膠電泳分離結(jié)合基質(zhì)輔助激光解析飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF-TOF)，以及“shotgun”等多種技術路線進行分離和鑒定，一共鑒定了848個非冗余蛋白質(zhì)。通過生物信息學手段，對鑒定的結(jié)果進行了功能分類，并且繪制鑒定結(jié)果的蛋白質(zhì)相互作用關系圖。另外，對鑒定到的蛋白質(zhì)中

4、的Galectin-1，nm23，Keratin 8，HSP-70，VCP進行了免疫細胞學分析，發(fā)現(xiàn)這些在前人研究中定位在胞漿和核上的蛋白質(zhì)，同樣也定位在細胞膜上。 第三部分，對不同分化程度的鼻咽癌細胞系CNE1和CNE2的細胞質(zhì)膜進行了差異蛋白質(zhì)組的分析。通過Percoll密度梯度離心，用Western Dot分析，取富集了細胞質(zhì)膜的一層，用丙酮沉淀后再裂解得到蛋白質(zhì)。采取2DE的方法對蛋白質(zhì)進行分離鑒定。對2DE的圖譜進行了