羧乙基殼聚糖-納米羥基磷灰石復合材料的制備與組織工程氣管軟骨構建的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 合成一種新型的組織工程支架材料—羧乙基殼聚糖/納米羥基磷灰石(NCECS/n-HA)復合材料，并探討兔氣管軟骨細胞與NCECS/n-HA材料的相容性，及構建組織工程氣管軟骨的可行性。
　　 方法：
　　 (1)通過傅立葉紅外光譜儀(FTIR)檢測復合物材料中官能團的改變。(2)通過X射線衍射分析(XRD)對材料晶體結構的改變做出判斷。(3)通過掃描電鏡分析n-HA在NCECS中的分散情況。(4)干態(tài)

2、樣本使用WDW-5型拉伸測試機。濕態(tài)樣本為固態(tài)樣本在PBS液中浸泡24h制成，使用低張力拉伸測試儀(FGC-0.2B)測試。記錄每組標本的拉伸強度和最大伸張率。(5)從6個月大的大耳白兔取氣管軟骨片段，Ⅱ型膠原酶消化，將所獲得軟骨細胞傳代培養(yǎng)。第3代軟骨細胞種植到NCECS/n-HA膜上，計算膜上的軟骨細胞2，6，12h細胞粘附率；(6)將第3代軟骨細胞分別種植于96孔板內的NCECS/n-HA膜上，分別于1，3，5，7，9d取出，用M

3、TT法測定細胞增殖活性。并于第9d通過掃描電鏡觀察細胞形態(tài)。(7)通過真空冷凍干燥法制得NCECS/n-HA泡沫支架。將第3代軟骨細胞種植于NCECS/n-HA三維泡沫支架上。細胞-支架復合物在裸鼠體內培養(yǎng)90d，然后取出分別進行HE染色、Ⅱ型膠原免疫組化染色和甲苯胺藍染色，觀察軟骨細胞基質分泌情況。
　　 結果：
　　 (1)FTIR結果顯示NCECS中的羧基與n-HA分子發(fā)生了交互作用。(2)XRD分析結果顯示n-H

4、A與NCECS的混合并沒有影響二者的晶體結構。(3)掃描電鏡分析結果顯示n-HA分子和NCECS之間可能形成某種分子交聯，使得n-HA分子可以很好地分散于NCECS溶液中。(4)力學檢測發(fā)現n-HA的加入使得NCECS的機械性能下降，但是NCECS/n-HA復合物的機械性仍能符合組織工程支架材料的要求。(5)兔氣管軟骨在NCECS/n-HA膜上的12h黏附率為86.33％，與對照組相比，無明顯統計學差異。(6)MTT法示軟骨細胞在NCE