抗MATSA單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、馬立克氏病(Marek’sdisease，MD)腫瘤相關(guān)表面抗原(Marek’sdiseasetumor-associatedsurfaceantigen，MATSA)是MD腫瘤細(xì)胞和MD成淋巴系細(xì)胞表面存在的特異性抗原，可刺激機(jī)體產(chǎn)生對(duì)MD免疫非常重要的抗腫瘤免疫應(yīng)答，并可用于MD的鑒別診斷。本研究用純化的MATSA免疫Balb/c小鼠，取脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，間接ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株，并對(duì)陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞染色體

2、進(jìn)行分析。將陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株接種Balb/c小鼠制備單克隆抗體(McAb)腹水，硫酸銨鹽析法粗提McAb并鑒定亞類。通過制備MATSA的McAb，為進(jìn)一步研究MD腫瘤提供試驗(yàn)材料和理論依據(jù)。研究取得如下結(jié)果。 1.以純化的MATSA為抗原免疫5只Balb/c小鼠，共免疫6次，間接ELISA測(cè)定小鼠血清中MATSA抗體。結(jié)果表明，第3次免疫后，測(cè)得各小鼠血清中抗體效價(jià)分別為26、26、24、26、26；第4次免疫后，抗體效價(jià)分別為

3、26、26、26、26、27；第5次免疫后，抗體效價(jià)分別為28、28、29、28、28；第6次免疫后，抗體效價(jià)分別為213、213、213、213、213，抗體效價(jià)明顯升高，可以用于制各MATSA的McAb。 2.先后取免疫好的2只小鼠脾細(xì)胞，進(jìn)行了2次細(xì)胞融合，第一次用3號(hào)小鼠，融合后未出現(xiàn)雜交瘤細(xì)胞，第二次用1號(hào)小鼠，融合后鋪4塊板，共384個(gè)孔，其中116個(gè)孔有融合細(xì)胞，融合率為30.2％。經(jīng)間接ELISA法篩選，抗體陽(yáng)性

4、孔為22個(gè)，陽(yáng)性率為19％。從陽(yáng)性孔中選陽(yáng)性O(shè)D值高、生長(zhǎng)狀態(tài)好的孔，用有限稀釋法經(jīng)過3次克隆，篩選到3株能穩(wěn)定分泌抗MATSA單克隆體的細(xì)胞株。雜交瘤細(xì)胞傳代培養(yǎng)、液氮凍存及復(fù)蘇后仍能穩(wěn)定地分泌抗體，ELISA檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞培養(yǎng)上清效價(jià)達(dá)26。 3.對(duì)篩選出的3株雜交瘤細(xì)胞用秋水仙素阻斷法進(jìn)行核型分析，雜交瘤細(xì)胞染色體數(shù)目為52±2對(duì)，接近兩種親本細(xì)胞染色體數(shù)目總和，證明為兩種親本細(xì)胞融合后的雜交體。 4.將雜交瘤細(xì)胞株