紅豆杉細(xì)胞中紫杉醇的分離純化新工藝研究.pdf

1、紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)是目前解決紫杉醇藥源緊張問題最有前途的技術(shù)之一。傳統(tǒng)生產(chǎn)紫杉醇的原料為植物組織材料，與之相應(yīng)已有較成熟的規(guī)模生產(chǎn)工藝。隨著新型分離技術(shù)的不斷發(fā)展，傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝在某些方面已不能適應(yīng)生產(chǎn)原料逐漸由植物過渡為細(xì)胞培養(yǎng)液的趨勢(shì)。本研究借鑒傳統(tǒng)紫杉醇分離工藝，以更簡(jiǎn)便的分離方法、更低的生產(chǎn)成本、更高的產(chǎn)量為研究目的，利用現(xiàn)代色譜理論為優(yōu)化依據(jù)，針對(duì)紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇的關(guān)鍵技術(shù)之一，提出了一套新的分離純化工藝與方法。主要成果如

2、下：
　　 ⑴使用不同分子質(zhì)量截留值的有機(jī)濾膜將紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞與有效成分分段截留。該方法可將原料體積大幅度縮小，同時(shí)減少了胞外紫杉醇的流失，也有利于將細(xì)胞中高極性雜質(zhì)排出，對(duì)于工業(yè)成本降低與原料的充分利用有重要意義。
　　 ⑵在上步分離步驟后，將膜截留的固體物制成甲醇浸膏。試驗(yàn)了若干樹脂填料對(duì)紫杉醇的吸附作用，結(jié)果顯示D-101型大孔吸附樹脂可較好地富集浸膏中的紫杉醇。使用乙醇-水體系洗脫，紫杉醇純度提高至0.8

3、%，回收率比傳統(tǒng)液-液萃取工藝略高。此工藝優(yōu)勢(shì)在于填料的可回收性好、上樣率較高、洗脫溶劑無(wú)毒等，以期工業(yè)放大后替代傳統(tǒng)液-液萃取工藝。
　　 ⑶實(shí)驗(yàn)用自制的堿性氧化鋁柱與C18柱在常壓下對(duì)富集產(chǎn)物中的紫杉醇進(jìn)行中度純化，在未對(duì)層析條件進(jìn)行優(yōu)化的情況下，紫杉醇的純度從0.8%提高到8%，進(jìn)一步到85%，回收率分別為108%與98%。顯示了堿性氧化鋁與反相C18柱組合對(duì)紫杉醇的后續(xù)純化或精制具有良好的技術(shù)適用性。由細(xì)胞培養(yǎng)液到反相填