姜黃素的提取、分離及抑菌、抗腫瘤活性研究.pdf

1、近年來，隨著癌癥發(fā)病率的不斷升高，天然藥物抗腫瘤作用日益成為研究熱點，尤其是近年來國外也逐步重視對天然藥物的應用。
　　本文以常用中藥姜黃為材料，通過探索姜黃素的測定方法、分離方法、超高壓提取方法，揮發(fā)油成分的鑒定，姜黃素的抑菌、抗腫瘤活性及揮發(fā)油抑菌的檢測，建立了姜黃從有效成分提取到活性鑒定的實驗方法。
　　實驗具體分為七部分:
　　一、姜黃素的測定方法
　　通過對分光光度法及高效液相色譜法對姜黃素總含量的測定

2、，發(fā)現(xiàn)姜黃素的含量與分光光度法中的吸光度及高效液相色譜法中的峰面積均成線性關系，且回收率及精密度實驗均顯示兩種方法可靠穩(wěn)定，但將兩種方法的測定結果進行了比較，發(fā)現(xiàn)光度法的測定結果略高于色譜法。
　　二、姜黃素的分離方法
　　分別使用C18與C30柱，考察了三種姜黃素的分離效果，結果表明使用甲醇-水等度洗脫，在相同的洗脫條件下，三種姜黃素在C30柱上的分離效果遠遠優(yōu)于C18柱，使用組成簡單的甲醇-水為流動相，不必使用復雜的梯度

3、洗脫程序就可以獲得基線分離，并且分離時間也令人滿意。并根據三種組分的化學結構、相對極性、色譜保留時間及紫外光譜特征分析，對三個色譜峰進行了鑒定，分別為去二甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素。
　　三、氣相色譜-質譜分離與鑒定姜黃揮發(fā)油成分
　　從姜黃提取的揮發(fā)油中分離出32個色譜峰，共鑒定了22個，占被測總量的85.94％，其主要成分為:芳姜黃酮(16.06％)、β-姜黃烯(11.40％)、β-倍半水芹烯(7.27％)、大

4、根香葉酮(6.86％)、表-α-綠芹烯(5.85％)、芳-姜黃烯(5.43％)、α-姜黃酮(5.38％)、桉樹腦(5.25％)和苯甲醇(5.24％)。這與文獻報道的姜黃揮發(fā)油的組成主要以萜類化合物為主基本一致。
　　四、超高壓提取姜黃素的工藝參數(shù)優(yōu)化
　　在測定提取溶劑、溶劑濃度、壓力、提取時間、固液比、提取次數(shù)等因素對提取率的影響基礎上，通過正交實驗確定超高壓提取過程中的最優(yōu)因素組合。通過實驗發(fā)現(xiàn)UHPE最佳提取工藝條件為

5、:乙醇濃度70％，液固比為45:1，壓力為350MPa，提取時間3.5 min。在上述最佳提取工藝條件下，重復提取3次，總姜黃素的平均提取率為28.82 mg·g-1，大于正交實驗結果中的最高值(28.49 mg·g-1)，說明利用正交實驗優(yōu)化UHPE提取姜黃素的提取工藝是成功的。
　　五、姜黃素的抑菌作用研究
　　提取姜黃素，利用平板打孔法和藥液二倍稀釋法對抑菌作用進行定性、定量測定。結果:一定濃度的姜黃色素對大腸桿菌、枯

6、草芽孢桿菌、酵母菌、黑曲霉、白地霉都有抑制作用，其抑菌作用強弱的順序為:大腸桿菌>黑曲霉>枯草芽孢桿菌>酵母菌>白地霉，對大腸桿菌的最低抑菌濃度是0.78mg/ml，對黑曲霉的最低抑菌濃度是1.56mg/ml，對枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度是1.56mg/ml，對酵母菌的最低抑菌濃度時3.125mg/ml，對白地霉的最低抑菌濃度是6.25mg/ml。
　　六、姜黃揮發(fā)油的抑菌活性研究
　　用石油醚提取姜黃揮發(fā)油，除去石油醚，收

7、集揮發(fā)油，配制成相應的濃度。利用平板打孔法和藥液二倍稀釋法對抑菌作用進行定性、定量測定。結果顯示姜黃揮發(fā)油對大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌、產阮假絲酵母菌和白地霉均有抑菌作用，且大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌、產阮假絲酵母的最低抑菌濃度為6.25mg/ml，白地霉的最低抑菌濃度為3.125mg/ml，但對黑曲霉無抑菌作用。其中姜黃揮發(fā)油對白地霉的抑制作用最強。
　　七、姜黃素對HepG2細胞增殖的影響
　　用不同濃度的姜黃素處理