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1、目的:采用不同濃度的龍葵堿(Solanine)作用人胰腺癌細(xì)胞Panc-1,從細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、抑制率及凋亡率來(lái)研究龍葵堿對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Panc-1的凋亡誘導(dǎo)作用。并通過(guò)檢測(cè)不同濃度龍葵堿作用Panc-1細(xì)胞后P53、Bcl-2和Bax的變化,探討龍葵堿誘導(dǎo)Panc-1細(xì)胞凋亡與P53、Bcl-2和Bax的表達(dá)的關(guān)系,以及在龍葵堿誘導(dǎo)細(xì)Panc-1胞凋亡機(jī)制中的作用。
方法:通過(guò)倒置顯微鏡拍照觀察龍葵堿作用后Panc-1細(xì)胞的
2、形態(tài)學(xué)改變;CCK-8比色法檢測(cè)龍葵堿對(duì)Panc-1細(xì)胞增殖的抑制作用;用流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;并以相對(duì)定量RT-PCR測(cè)定P53、Bcl-2和Bax的mRNA表達(dá);蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)基因P53和Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:龍葵堿顯著抑制人胰腺癌細(xì)胞Panc-1生長(zhǎng),并具有濃度時(shí)間依賴性。倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)隨著龍葵堿濃度增加和作用
3、時(shí)間延長(zhǎng),Panc-1細(xì)胞變圓、皺縮、漂浮并破碎,死亡逐漸增加;CCK-8比色法發(fā)現(xiàn)隨著龍葵堿濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng),對(duì)Panc-1細(xì)胞的增殖抑制作用逐漸增強(qiáng);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Panc-1細(xì)胞的凋亡率隨著龍葵堿濃度增加而逐漸增加;相對(duì)定量RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示龍葵堿能上調(diào)Panc-1細(xì)胞P53、Bax的mRNA和蛋白表達(dá),表達(dá)量隨著龍葵堿濃度增大逐漸增多,同時(shí)下調(diào)Bcl-2 mRNA的和蛋白表達(dá);表達(dá)量隨著龍葵
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