難治性癲癇患者顳葉皮層水通道蛋白4的表達(dá)情況.pdf

1、目的： 癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)的一種常見病、多發(fā)病，其中大部分患者用目前的抗癲癇藥物能有效控制發(fā)作，但仍有20-30％癲癇患者的治療效果差，不能完全控制其發(fā)作，稱為難治性癲癇。其發(fā)病機制一直成為研究的熱點。其中癲癇腦組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用越來越多的受到重視。星形膠質(zhì)細(xì)胞的水通道蛋白4（Aquaporin4，AQP4）對于調(diào)節(jié)腦內(nèi)微環(huán)境水鹽代謝，促膠質(zhì)細(xì)胞遷移形成膠質(zhì)疤痕，以及調(diào)控神經(jīng)興奮性起到至關(guān)重要的作用，而這些作用與難治性癲癇的發(fā)

2、病機制有著密切的關(guān)系。因此，本研究預(yù)通過比較難治性癲癇患者與腦外傷患者顳葉皮層腦組織內(nèi)AQP4表達(dá)情況的差異，進一步探討AQP4在難治性癲癇的發(fā)生和發(fā)展中起到的作用，對于開發(fā)新的抗癲癇藥物，尋找新的治療途徑，改善難治性癲癇患者的預(yù)后起到非常重要的作用。 方法： 選取實驗組：32例難治性癲癇患者顳葉皮層腦組織，患者符合以下標(biāo)準(zhǔn)： ①有EP的典型表現(xiàn)和腦電圖特征，用三種或者三種以上一線抗癲癇藥物且血藥濃度處于有效范圍

3、內(nèi)、治療兩年以上發(fā)作仍不能控制者； ②發(fā)作類型符合1981年國際抗EP聯(lián)盟發(fā)作類型分類； ③頭顱CT或MRI檢查未發(fā)現(xiàn)進行性病灶； ④手術(shù)中未發(fā)現(xiàn)除EP外的其它神經(jīng)系統(tǒng)病變和可能引起EP發(fā)作的病因； ⑤術(shù)前評估發(fā)現(xiàn)有比較固定的癇樣放電灶，且能進行手術(shù)者。 選取對照組：10例腦外傷患者顳葉皮層腦組織，患者符合以下標(biāo)準(zhǔn): ①無中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病史； ②除外傷外未發(fā)現(xiàn)腦部有能引起EP發(fā)

4、作的結(jié)構(gòu)和功能損傷； ③家屬同意，并簽注知情同意書。兩組年齡統(tǒng)計無顯著性差異。根據(jù)術(shù)前臨床表現(xiàn)、蝶骨電極、VEEG監(jiān)測和頭顱MRI檢查綜合判斷進行定位，術(shù)中皮層電極對致癲灶定位，監(jiān)測指導(dǎo)手術(shù)，將病灶及或附近異常放電的腦組織切除后，立即復(fù)查ECOG見異常波消失或基本消失，選取切除腦組織。收集實驗組和對照組顳葉標(biāo)本，采用免疫組化、免疫熒光雙標(biāo)、western blot對AQP4表達(dá)部位和表達(dá)量進行測定，進一步探討AQP4與難治性癲癇

5、的關(guān)系。 結(jié)果： 1.臨床特點比較：實驗組和對照組年齡、性別、所取腦組織的解剖部位的無顯著差異。 2.實驗組顳葉皮層腦切片AQP4的免疫反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色點狀或顆粒狀沉積在星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)，神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)。AQP4陽性反應(yīng)產(chǎn)物主要表達(dá)在細(xì)胞膜上，尤其是在星形膠質(zhì)細(xì)胞終足。對照組AQP4表達(dá)呈弱陽性。經(jīng)生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進行定量分析，統(tǒng)計分析比較，實驗組與對照組累積光密度IOD有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）

6、。 3.免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果進一步探討AQP4在上述部位的分布特征，將AQP4抗體與GFAP抗體進行免疫熒光雙標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗AQP4免疫活性與抗GFAP免疫活性在星形交織細(xì)胞膜上疊加，特別是在星形膠質(zhì)細(xì)胞終足，呈明顯的共表達(dá)。 4.Western blot結(jié)果顯示AQP4蛋白條帶在相應(yīng)的分子量處出現(xiàn)蛋白條帶。與對照組相比，實驗組灰度值明顯增加。這與免疫組化結(jié)果一致。 結(jié)論： 1．免疫組化和免疫熒光雙標(biāo)證實A