環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素長(zhǎng)期作用對(duì)大鼠移植腎和睪丸的功能和組織學(xué)的影響.pdf

1、神經(jīng)鈣蛋白抑制劑（包括環(huán)孢素A和他克莫司）一直是過(guò)去二十多年固體器官移植術(shù)后免疫抑制方案的基石。環(huán)孢素A（CsA）在上世紀(jì)八十年代初期開(kāi)始運(yùn)用于臨床后革命化了移植腎的臨床效果，使腎移植成為處理各種終末期腎病的最有效的治療方案。然而，盡管移植腎的近期成功率已明顯提高（1年的人/腎存活率可達(dá)90％），但其長(zhǎng)期存活率的改善并不樂(lè)觀。影響移植腎長(zhǎng)期存活的因素很多，除由于心血管、感染和惡性腫瘤導(dǎo)致的受者帶功能腎死亡外，慢性移植腎腎?。–AN）的發(fā)

2、生是導(dǎo)致移植腎遠(yuǎn)期功能喪失的最主要原因。研究發(fā)現(xiàn)各種免疫和非免疫的因素導(dǎo)致了慢性移植腎腎病的發(fā)生，而神經(jīng)鈣蛋白抑制劑（CNI）的毒性是一重要的非免疫的因素。此外，神經(jīng)鈣蛋白抑制劑尚有致動(dòng)脈性高血壓、高脂血癥、糖尿病和神經(jīng)毒等毒副作用，這些副作用無(wú)疑會(huì)加速遠(yuǎn)期移植腎的丟失。因此采用其它一些具同等免疫抑制效應(yīng)而毒副作用相對(duì)較小的新型免疫抑制劑如雷帕霉素來(lái)代替神經(jīng)鈣蛋白抑制劑一直是移植界用以提高移植腎遠(yuǎn)期存活率的策略。 已有大量文獻(xiàn)報(bào)

3、道腎移植術(shù)后將環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素后多數(shù)病人的肌酐清除率得以改善并減緩了移植腎組織學(xué)病變的進(jìn)展。然而這些研究的隨訪時(shí)間都很短，多數(shù)少于12月，而且就我們所知至今尚無(wú)轉(zhuǎn)換時(shí)間超過(guò)2年的長(zhǎng)期隨訪結(jié)果的報(bào)道。因而，腎移植術(shù)后將環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素后短期的肌酐清除率升高是否會(huì)帶來(lái)長(zhǎng)期的腎功能改善的前景尚不能明確。另外，有文獻(xiàn)報(bào)道雷帕霉素的使用導(dǎo)致了男性性生殖功能的損害。因而，可能會(huì)導(dǎo)致性生殖功能受損是臨床環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素需重視的一大問(wèn)

4、題。但據(jù)我們所知，文獻(xiàn)尚無(wú)有關(guān)腎移植術(shù)后環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素對(duì)男性性生殖功能的影響的相關(guān)研究報(bào)道。此外，由于睪丸組織難以獲取，文獻(xiàn)也無(wú)雷帕霉素致性生殖功能損害時(shí)睪丸組織學(xué)變化的研究資料。 在本課題研究中，我們采用Fisher→Lewis移植腎動(dòng)物模型研究并比較了環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素和環(huán)孢素A持續(xù)使用對(duì)移植腎大鼠長(zhǎng)期作用后腎臟和睪丸的功能和組織學(xué)的影響。 第一部分環(huán)孢素A（CsA）轉(zhuǎn)換為雷帕霉素（Rapa）對(duì)大鼠移植腎

5、功能和組織學(xué)的長(zhǎng)期作用結(jié)果 目的：研究并比較CsA轉(zhuǎn)換為Rapa與CsA持續(xù)使用對(duì)大鼠移植腎的長(zhǎng)期作用結(jié)果。 方法：建立Fisher→Lewis大鼠移植腎模型，予以10天1.5mg/kg/d的CsA后隨機(jī)分成4組：第1組（轉(zhuǎn)換為Rapa組，n=10）予以10mg/kg/d的CsA至第8周后轉(zhuǎn)換為0.5mg/kg/d的Rapa至第24周；第2組（CsA持續(xù)使用組，n=10）予以10mg/kg/d的CsA至第24周；第3組（

6、CsA撤離組，n=8）予以10mg/kg/d的CsA至第8周后再予以安慰劑至第24周；第4組（對(duì)照組，n=8）予以安慰劑至第24周。另6只Lewis→Lewis同系移植鼠作為第5組（同系移植組）。每4周抽血查血肌酐和血紅蛋白濃度，留24小時(shí)尿查尿肌酐濃度和蛋白定量，測(cè)量大鼠體重并計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率。第24周時(shí)處死動(dòng)物，獲取移植腎標(biāo)本行組織學(xué)和免疫組化研究并采用定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)換生長(zhǎng)因子β1和血小板源性生長(zhǎng)因子A鏈的表達(dá)。 結(jié)果：

7、血肌酐、內(nèi)生肌酐清除率在第1組（轉(zhuǎn)換為Rapa組）、第2組（CsA持續(xù)使用組）和第3組（CsA撤離組）之間從第4周到24周并無(wú)明顯差異，但在第4組對(duì)照組第24周時(shí)可見(jiàn)較其它三組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的較高的血肌酐濃度和較低的內(nèi)生肌酐清除率。對(duì)比對(duì)照組（第4組），CsA和Rapa的使用（第1，2，3組）均顯著地降低了尿蛋白的排泄量，這種尿蛋白排泄的差異在第12周時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)并一直增加延續(xù)至24周。CsA轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）較CsA的持續(xù)使用（第2

8、組）進(jìn)一步降低了尿蛋白的排泄，這種差異在第24周達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）。CsA和Rapa的使用（第1，2，3組）均大體保護(hù)了移植腎組織學(xué)的破壞；而對(duì)比CsA持續(xù)使用或撤離（第2、3組），CsA轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）則進(jìn)一步地降低了移植腎組織學(xué)Banff評(píng)分、顯著地減少了腎組織中浸潤(rùn)的CD68陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞數(shù)和CD5陽(yáng)性的淋巴細(xì)胞數(shù)以及TGF—β1和α—SMA的染色強(qiáng)度以及轉(zhuǎn)換生長(zhǎng)因子β1和血小板源性生長(zhǎng)因子A鏈的mRNA的表

9、達(dá)量。 結(jié)論：對(duì)比CsA的持續(xù)使用，CsA轉(zhuǎn)換為Rapa減少了移植腎遠(yuǎn)期的尿蛋白的排泄、減緩了遠(yuǎn)期移植腎組織學(xué)的損害并下調(diào)了纖維相關(guān)基因的表達(dá)。這一免疫抑制方案可能改善臨床移植腎的遠(yuǎn)期成功率。 第二部分環(huán)孢素A（CsA）轉(zhuǎn)換為雷帕霉素（Rapa）長(zhǎng)期作用對(duì)移植腎大鼠睪丸功能和形態(tài)學(xué)的影響 目的：研究并比較CsA轉(zhuǎn)換為Rapa與CsA長(zhǎng)期作用對(duì)移植腎大鼠睪丸功能和組織形態(tài)學(xué)的影響。 方法：建立Fisher→

10、Lewis大鼠移植腎模型，予以10天1.5mg/kg/d的CsA后隨機(jī)分成4組：第1組（轉(zhuǎn)換為Rapa組，n=10）予以10mg/kg/d的CsA至第8周后轉(zhuǎn)換為0.5mg/kg/d的Rapa至第24周；第2組（CsA持續(xù)使用組，n=10）予以10mg/kg/d的CsA至第24周；第3組（CsA撤離組，n=8）予以10mg/kg/d的CsA至第8周后再予以安慰劑至第24周；第4組（對(duì)照組，n=8）予以安慰劑至第24周。另6只Lewis→

11、Lewis同系移植鼠作為第5組（同系移植組）。第24周時(shí)處死動(dòng)物，抽血測(cè)睪酮（T）、卵泡刺激素（FSH）和黃體生成素（LH）值，并計(jì)算T/LH比率。獲取右側(cè)睪丸標(biāo)本，記錄其重量并行組織學(xué)分析，光鏡下隨機(jī)測(cè)量曲細(xì)精管直徑，并采用一量化的組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估睪丸的組織學(xué)損傷。在第1組、第2組和第5組隨機(jī)選取2例標(biāo)本行超微結(jié)構(gòu)檢查。 結(jié)果：對(duì)性激素的影響上，CsA的使用（第2、3組）和轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）對(duì)比同系移植組（第5組，1.

12、05±0.17ng/ml）均導(dǎo)致了大鼠血清睪酮水平的下降，并同時(shí)伴L(zhǎng)H和FSH水平的升高，但只有轉(zhuǎn)Rapa組（第1組，0.85±0.09 ng/ml）的睪酮水平下降達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異水平（p=0.008）。在T/LH比率上，同系移植組（第5組，0.74±0.14）較其它組均顯著為高，而轉(zhuǎn)換為Rapa組（第1組）T/LH值最低（0.59±0.03。CsA的使用（第2、3組）和轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）對(duì)比同系移植組（第5組，243.0±10.1

13、mg，313.5±10.1um）均導(dǎo)致了大鼠右側(cè)睪丸重量和平均曲細(xì)精管直徑的顯著下降，尤以轉(zhuǎn)Rapa組（第1組，206.2±6.4mg，294.2±15.8um）下降最為明顯。在睪丸組織學(xué)損傷評(píng)分上，CsA轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）和CsA的持續(xù)使用（第2組）對(duì)比同系移植組（第5組，1.8±0.8）均顯著為高，CsA轉(zhuǎn)換為Rapa組（第1組，8.3±1.6）較CsA持續(xù)使用組（第2組，7.7±1.5）損傷評(píng)分更高但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異水平（P=

14、0.388）。電鏡檢查發(fā)現(xiàn)CsA轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）導(dǎo)致Leydig細(xì)胞線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張和Sertoli細(xì)胞的細(xì)胞器顯著減少；CsA的持續(xù)使用（第2組）導(dǎo)致Leydig細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張和Sertoli細(xì)胞細(xì)胞器的減少，而同系移植組（第5組）睪丸組織的超微結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)明顯異常。 結(jié)論：CsA轉(zhuǎn)換為Rapa長(zhǎng)期作用對(duì)比CsA的持續(xù)使用導(dǎo)致了移植腎大鼠睪丸更嚴(yán)重的功能和組織學(xué)的損傷。臨床上對(duì)于男性移植患者尤其是年輕患者在采用這種