甲磺酸卡莫他特對(duì)腦出血后腦水腫形成抑制作用的研究.pdf

1、目的：1.研究補(bǔ)體的蛋白溶解片段在腦出血（intracerebral hemorrhage，ICH）后腦水腫形成中的作用；2.研究甲磺酸卡莫他特（Camostat Mesilate，CM）對(duì)補(bǔ)體激活過(guò)程中形成的蛋白溶解片段的影響；3.觀察CM對(duì)ICH后腦水腫形成的抑制作用；4.探討CM對(duì)ICH后腦水腫形成抑制作用的機(jī)制。 方法：1.分組：將90只SD雄性大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組，每組30只，每組分成6個(gè)觀

2、察時(shí)點(diǎn)，分別為術(shù)后12h、1d、2d、3d、7d、14d，每個(gè)時(shí)點(diǎn)5只大鼠。2.造模及給藥：采用立體定向儀把自體血注入大鼠右側(cè)尾狀核制作大鼠ICH動(dòng)物模型，術(shù)后兩小時(shí)進(jìn)行模型成功評(píng)價(jià)，治療組于造模成功后胃內(nèi)注入CM50mg/kg—d； ICH對(duì)照組于造模成功后每天胃內(nèi)注入等體積生理鹽水；假手術(shù)組的手術(shù)操作程序與ICH組相同，但尾狀核不注入自體血，針留置約10分鐘。3.術(shù)后各時(shí)點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能障礙評(píng)分。4.干濕法觀察不同時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織含

3、水量。5.放射免疫法測(cè)定不同時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織IL—1β、IL—6、TNF—α含量。6.比色法測(cè)定不同時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織非血紅素鐵含量。7.免疫組化法分析不同時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織補(bǔ)體片段C5a、C9表達(dá)情況。 結(jié)果：1.假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)神經(jīng)功能障礙評(píng)分變化：ICH對(duì)照組在術(shù)后12h～14d的神經(jīng)功能障礙評(píng)分顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）；在ICH對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)，以術(shù)后2d的神經(jīng)功能障礙評(píng)分

4、最低，與術(shù)后3d相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與該組其他時(shí)點(diǎn)差異有顯著性（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后12h～7d的神經(jīng)功能障礙評(píng)分顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后2d～7d的神經(jīng)功能障礙評(píng)分顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的ICH對(duì)照組（P<0.05）。2.假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織含水量變化：ICH對(duì)照組在術(shù)后1d～7d的腦組織含水量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.0

5、5）；在ICH對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)，以術(shù)后2d的腦組織含水量最高，與術(shù)后3d相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與該組其它時(shí)點(diǎn)相比差異有顯著性（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后1d～3d的腦組織含水量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后1d～7d的腦組織含水量顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的ICH對(duì)照組（P<0.05）。3.假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織IL—1β含量的變化：ICH對(duì)照組在術(shù)后12h～

6、3d的IL—1β含量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）；在ICH對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)，以術(shù)后2d IL—1β含量最高，與該組其它時(shí)點(diǎn)相比差異有顯著性（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后12h～3d的IL—1β含量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后2d～3d的IL—1β含量顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的ICH對(duì)照組（P<0.05）。4.假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織IL—6含量的變化：IC

7、H對(duì)照組在術(shù)后1d～7d的IL—6含量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）；在ICH對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)，以術(shù)后2d IL—6含量最高，與該組其它時(shí)點(diǎn)相比差異有顯著性（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后1d～3d的IL—6含量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后2d～3d的IL—6含量顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的ICH對(duì)照組（P<0.05）。5.假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)TNF—α含量的變化：ICH

8、對(duì)照組在術(shù)后12h～3d的TNF—α含量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）；在ICH對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)，以術(shù)后2d TNF—α含量最高，與術(shù)后12h、1d、3d時(shí)相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與術(shù)后7d、14d相比差異有顯著性（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后1d～2d的TNF—α含量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后1d～2d的TNF—α含量顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的ICH對(duì)照組（P<0.05）。6.

9、假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織非血紅素鐵含量的變化：ICH對(duì)照組在術(shù)后2d～14d的非血紅素鐵含量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）；在ICH對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)，以術(shù)后14d非血紅素鐵含量最高，與該組其它時(shí)點(diǎn)相比差異有顯著性（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后2d～14d的非血紅素鐵含量顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后2d～14d的非血紅素鐵含量顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的ICH對(duì)

10、照組（P<0.05）。7.假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織補(bǔ)體C5a表達(dá)的變化：ICH對(duì)照組在術(shù)后12h～14d的補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）；在ICH對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)，以術(shù)后2d補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多，與該組其它時(shí)點(diǎn)相比差異有顯著性（P<0.05）； CM治療組在術(shù)后12h～14d的補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著高于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的假手術(shù)組（P<0.05）； CM治療組在術(shù)

11、后12h～7d的補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的ICH對(duì)照組（P<0.05）。8.假手術(shù)組、ICH對(duì)照組及CM治療組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)血腫周?chē)X組織補(bǔ)體C9表達(dá)的變化：假手術(shù)組各時(shí)點(diǎn)均未見(jiàn)補(bǔ)體C9表達(dá)；在ICH對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)，以術(shù)后1d補(bǔ)體C9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多，與該組其它時(shí)點(diǎn)相比差異有顯著性（P<0.05）； CM治療組在12h～7d的補(bǔ)體C9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著低于各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的ICH對(duì)照組（P<0.05）。9.直線(xiàn)相關(guān)分析：（1）I

12、CH對(duì)照組：神經(jīng)功能障礙評(píng)分與腦組織含水量、IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量、補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、補(bǔ)體C9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均呈負(fù)相關(guān)；腦組織含水量與IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量、補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、補(bǔ)體C9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均呈正相關(guān)；補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量均呈正相關(guān)；補(bǔ)體C9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量均呈正相關(guān)。（2）C

13、M治療組：神經(jīng)功能障礙評(píng)分與腦組織含水量、IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量、補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、補(bǔ)體C9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均呈負(fù)相關(guān)；腦組織含水量與IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量、補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、補(bǔ)體C9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均呈正相關(guān)；補(bǔ)體C5a表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量均呈正相關(guān)；補(bǔ)體C9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與IL—1β含量、IL—6含量、TNF—α含量均呈正相關(guān)。

14、 結(jié)論：自體血制作SD大鼠ICH動(dòng)物模型，制作方法簡(jiǎn)單，易于操作，重復(fù)性好，與人ICH病理生理變化基本一致，可作廣泛使用。在ICH后，血腫周?chē)X組織補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生的補(bǔ)體溶解片段加重炎癥反應(yīng)，生成的膜攻擊復(fù)合物（membrane attack complex，MAC）破壞紅細(xì)胞，紅細(xì)胞的代謝產(chǎn)物參與了ICH后腦水腫的形成。在ICH后，應(yīng)用CM能改善其神經(jīng)功能，減輕其腦水腫。CM可通過(guò)抑制蛋白酶而阻礙補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而減輕炎癥反應(yīng)和減少紅