膜莢黃芪肉桂酸-4-羥化酶(C4H)基因克隆及植物表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、黃芪是豆科黃芪屬植物膜莢黃芪(A.membrcmaceus(fisch.)Bunge.)和蒙古黃芪(A.mongholicus Bge.)的干燥根，是補(bǔ)氣之常用中藥。肉桂酸-4-羥基化酶(C4H，EC1.14.13.11)，又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，催化肉桂酸羥化作用產(chǎn)生4-香豆酸鹽，是苯丙烷途徑中繼L-苯丙氨酸解氨酶（PAL）之后的第二個(gè)關(guān)鍵酶。為了從分子水平上了解 C4H基因的功能特性，本文從植物進(jìn)化的角度出發(fā)，根據(jù) Geneb

2、ank中，已有的豆科植物 C4H氨基酸保守序列為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)引物，通過(guò) RT-PCR和 cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(rapid amplification of cDNA ends，RACE)方法克隆膜莢黃芪 C4H基因，對(duì)其序列進(jìn)行分析，構(gòu)建了其植物表達(dá)載體,為進(jìn)一步研究其功能奠定了基礎(chǔ)。
　　研究結(jié)果如下：利用RT-PCR和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)，首次從膜莢黃芪中克隆了植物次生代謝中起關(guān)鍵作用的C4H基因全長(zhǎng)cDNA序列，命名為

3、AmC4H。AmC4H cDNA全長(zhǎng)1790bp，包括1515bp的ORF，53 bp的5′非轉(zhuǎn)譯區(qū)（5′UTR），195 bp的3′非轉(zhuǎn)譯區(qū)（3′UTR）和27 bp的polyA尾。推測(cè)其編碼505個(gè)氨基酸，分子量（MV）為57.86KDa，等電點(diǎn)（PI）值為8.98。經(jīng)同源性比較AmC4H與一些豆科植物序列高度同源。
　　利用生物信息學(xué)方法對(duì) AmC4H基因的蛋白質(zhì)基本性質(zhì)行了分析預(yù)測(cè)。結(jié)果表明AmC4H為易溶、親水性較強(qiáng)的蛋