“黃花”梨離體培養(yǎng)及轉(zhuǎn)基因初步研究.pdf

1、砂梨(Pyrus pyrifolia Nakai)在離體培養(yǎng)中外植體玻璃化和褐變現(xiàn)象嚴重，且受其基因型影響再生率低，建立優(yōu)良的離體培養(yǎng)體系及用于遺傳轉(zhuǎn)化的高效穩(wěn)定的再生體系一直是組織培養(yǎng)中待以克服的難點。本試驗以我國砂梨主栽品種黃花為試材，研究了防止試管梢玻璃化和褐變的一系列措施，并以黃花梨葉片為外植體研究了影響愈傷組織誘導率的幾個因素。探索通過黃化措施誘導腋生芽萌發(fā)，將有強大腋生芽萌發(fā)力的黃化試管梢基部作外植體進行了轉(zhuǎn)基因初步研究。主

2、要研究結(jié)果如下： 1.以砂梨栽培品種黃花為試材，研究了固化劑不同種類及瓊脂不同用量、糖源和6-BA對防止玻璃化梢的作用以及水楊酸和活性炭對防止試管梢褐變的作用。結(jié)果表明：不同固化劑由于其不同的理化性質(zhì)，Phytagel較Agarpowder和卡拉膠對防止試管梢玻璃化現(xiàn)象的效果好；隨著瓊脂濃度或蔗糖濃度的增加，試管梢玻璃化率均呈下降趨勢，在兼顧玻璃化率和繁殖系數(shù)的前提下分別選擇Agar powder 0.6％和蔗糖3％為最佳使用濃

3、度；6-BA的濃度越高玻璃化現(xiàn)象越嚴重，選用6-BA 3mg/L為無菌梢的繼代濃度。低濃度(10μmol/L)的水楊酸和適量(3～5g/L)的活性炭均可有效防止試管梢褐變。 2.以黃花梨葉片為外植體，研究了生長調(diào)節(jié)劑的不同搭配、2.4-D和6-BA的不同濃度配比、葉片不同部位和Cef對葉片愈傷誘導率的影響及不同添加物對愈傷組織生長的影響。試驗發(fā)現(xiàn)：在不同生長調(diào)節(jié)劑的搭配中，2.4-D和6-BA的搭配得到了最高的愈傷組織誘導率(3

4、3％)，將兩者的濃度分別設(shè)為2.4-D 1 mg/L和6-BA0.1mg/L時得到了較高的愈傷誘導率(85％)；低濃度(100mg/L)的Cef對愈傷誘導率有促進作用；葉片的不同的部位中，接近葉柄(帶葉柄)的部位愈傷誘導率最高(83％)；不同添加物對愈傷組織的生長影響不同，添加椰乳時對愈傷組織的增殖有明顯促進作用。 3.將黃花梨健壯的試管梢放置在黑暗處進行黃化處理時，梢基部會明顯膨大，在繼續(xù)進行暗處理后膨大的梢基部上可萌發(fā)出大量