難治性慢性乙肝患者干擾素信號途徑的初步研究.pdf

1、目前我國乙肝患者人數(shù)眾多，由乙肝病毒所致的慢性肝病及終末期肝病嚴(yán)重危害人們健康。而有效的抗病毒治療則可以顯著減少肝硬化、肝癌的發(fā)生。乙型肝炎的抗病毒治療已成為國內(nèi)、外專家的研究熱點(diǎn)。目前乙型肝炎抗病毒藥物主要以核苷類似物和干擾素為主。干擾素具有廣譜抗病毒，免疫調(diào)節(jié)等作用。體外研究發(fā)現(xiàn)，干擾素與細(xì)胞表面干擾素受體結(jié)合，激活經(jīng)典的JAK-STAT途徑，并激活多種信號分子，從而誘導(dǎo)多種抗病毒蛋白而發(fā)揮抗病毒作用，其中以2,5寡腺苷酸合成酶（2

2、',5’-OAS），抗粘蛋白（Mx）等最為重要。Mx蛋白是干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的分布于細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)，具有廣譜的抗病毒活性，對正黏病毒、副黏病毒、布尼亞病毒、棒狀病毒、小RNA病毒及乙肝病毒均有敏感的抗病毒作用。而2',5’-OAS可以啟動核酸水解酶，通過選擇性地降解病毒mRNA發(fā)揮抑制病毒的作用。關(guān)于干擾素在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)發(fā)揮抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用的分子機(jī)制目前尚不十分清楚，且在臨床治療過程中存在干擾素抵抗或治療無效的情況。為了深入研

3、究干擾素信號通路和抗病毒效應(yīng)分子，本文分別采用細(xì)胞模型和難治性慢性乙型肝炎患者的外周血單個核細(xì)胞，檢測干擾素刺激后不同時間點(diǎn)干擾素信號分子和抗病毒蛋白表達(dá)情況，以進(jìn)一步明確干擾素抗病毒作用機(jī)制。
　　 我們選取HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG 2.2.15作為細(xì)胞模型，同時采用無病毒復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞作為對照，用Real Time-PCR檢測干擾素刺激后不同時間點(diǎn)（基線、6小時、12小時、24小時）這兩種細(xì)胞干擾素抗病

4、毒蛋白表達(dá)情況。臨床研究患者的入組標(biāo)準(zhǔn)為已使用恩替卡韋治療9-36個月，HBV DNA陰性但未發(fā)生HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換。按照隨機(jī)分組的原則將患者分到A組和B組。A組使用長效干擾素PEG-IFN α-2a 規(guī)范治療一年，B組繼續(xù)使用恩替卡韋治療一年。兩組分別選取20名患者進(jìn)行干擾素信號途徑研究。我們在基線、4周、12周、24周采集外周血并提取PBMC。將PBMC分別提取蛋白和RNA，使用Real Time-PCR方法和Western-Bl

5、ot方法研究相關(guān)信號分子和抗病毒蛋白的表達(dá)。
　　 在細(xì)胞模型中，無HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2和有HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞系HepG2.2.15細(xì)胞在干擾素刺激后6小時、12小時和24小時的Mx和2,5-OAS表達(dá)量與基線相比均有明顯升高，峰值均在6小時。兩種細(xì)胞相比較，HepG2細(xì)胞較HepG2.2.15細(xì)胞其抗病毒蛋白的增高幅度更為顯著。在慢性乙肝患者中，A組在采用干擾素治療后PBMC中相關(guān)信號分子和Mx，2',5’-OA

6、S的mRNA和蛋白水平均有增高。而使用核苷類似物治療的B組患者的PBMC中干擾素信號分子STAT1和STAT2及其抗病毒蛋白Mx和2',5’-OAS表達(dá)沒有明顯變化。
　　 本研究說明在干擾素刺激后，HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞干擾素介導(dǎo)的抗病毒蛋白的表達(dá)明顯激活，但程度有一定差異，提示病毒復(fù)制是影響干擾素誘導(dǎo)有效抗病毒蛋白產(chǎn)生的因素。在NA治療取得了病毒學(xué)完全應(yīng)答，血清學(xué)應(yīng)答不佳的慢性乙肝患者，聯(lián)合/序貫干擾素治療可以