創(chuàng)傷膿毒癥中Th17細(xì)胞-CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞失衡的研究.pdf

1、【目的】研究創(chuàng)傷膿毒癥過(guò)程中Th17細(xì)胞與CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞平衡及相關(guān)細(xì)胞因子的變化情況，以及糖皮質(zhì)激素/糖皮質(zhì)激素受體對(duì)膿毒癥Th17/Treg的調(diào)控作用，豐富對(duì)創(chuàng)傷膿毒癥后免疫功能紊亂發(fā)生機(jī)制的認(rèn)識(shí)，并為探索調(diào)節(jié)創(chuàng)傷膿毒癥后免疫功能紊亂的措施提供新的治療靶點(diǎn)。
　　 【方法】臨床研究：收集2010年9月至2011年1月間我院創(chuàng)傷外科收治的35例創(chuàng)傷患者（其中13例并發(fā)膿毒癥、22例未并發(fā)膿毒癥）以及9

2、例健康志愿者進(jìn)行臨床研究。主要研究?jī)?nèi)容包括：（1）分離外周血淋巴細(xì)胞后流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Th17細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例；（2）實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time qPCR）檢測(cè)Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt mRNA 水平表達(dá)、CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA 水平表達(dá)；（3）分離外周血清檢測(cè)C 反應(yīng)蛋白和相關(guān)細(xì)胞因子（IL-4，IL-6，IL-10，IL

3、-17，IL-23，INF-γ，TGF-β）含量，結(jié)合臨床資料加以分析。
　　 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：利用Balb/C 小鼠建立盲腸結(jié)扎穿孔膿毒癥模型。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為膿毒癥組、干預(yù)組、假手術(shù)組及對(duì)照組，干預(yù)組在膿毒癥組的基礎(chǔ)上使用糖皮質(zhì)激素受體阻滯劑RU486 干預(yù)；觀察指標(biāo)包括（1）膿毒癥過(guò)程中不同時(shí)相小鼠脾臟淋巴細(xì)胞Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞比例；（2）脾臟細(xì)胞特征性的轉(zhuǎn)錄因子RORγt和Foxp3的mRNA 水平表達(dá)；（3）血清細(xì)胞因

4、子含量（IL-2、4、6、10、17、INF-γ、TGF-β等）；（4）膿毒癥后遲發(fā)型超敏反應(yīng)程度。
　　 【結(jié)果】臨床研究：創(chuàng)傷膿毒癥組住院天數(shù)和病死率均高于嚴(yán)重創(chuàng)傷組；嚴(yán)重創(chuàng)傷組外周血Th17細(xì)胞比例較健康對(duì)照組稍高但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，創(chuàng)傷膿毒癥組外周血Th17細(xì)胞比例明顯高于其它兩組；外周血Treg細(xì)胞比例，嚴(yán)重創(chuàng)傷組及創(chuàng)傷膿毒癥組均較健康對(duì)照組高，嚴(yán)重創(chuàng)傷組與創(chuàng)傷膿毒癥組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；外周血Th17/Treg細(xì)胞比

5、值創(chuàng)傷膿毒癥組較其它兩組高，嚴(yán)重創(chuàng)傷組與健康對(duì)照組比較略低；創(chuàng)傷膿毒癥組的RORγt mRNA 水平表達(dá)均高于其它兩組，健康對(duì)照組與嚴(yán)重創(chuàng)傷組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Foxp3 mRNA 水平表達(dá)，創(chuàng)傷膿毒癥組及嚴(yán)重創(chuàng)傷組均較健康對(duì)照組高，其中創(chuàng)傷膿毒癥組較嚴(yán)重創(chuàng)傷組稍高；創(chuàng)傷膿毒癥組血清TGF-β，IL-6 及IL-23 含量均明顯高于健康對(duì)照組；嚴(yán)重創(chuàng)傷組血清TGF-β和IL-6 含量明顯高于健康對(duì)照組，而血清IL-23含量與健康對(duì)照組

6、相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；創(chuàng)傷膿毒癥組與嚴(yán)重創(chuàng)傷組比較血清TGF-β含量無(wú)明顯差異，而血清IL-6，IL-23 含量明顯高于后者；創(chuàng)傷膿毒癥組外周血IL-17 含量明顯高于嚴(yán)重創(chuàng)傷組及健康對(duì)照組，其余兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；創(chuàng)傷膿毒癥組及嚴(yán)重創(chuàng)傷組外周血IL-10 含量明顯高于健康對(duì)照組，創(chuàng)傷膿毒癥組與嚴(yán)重創(chuàng)傷組比較IL-10 含量前者高于后者；膿毒癥組及創(chuàng)傷組血清CRP 含量均明顯高于對(duì)照組，膿毒癥組略高于創(chuàng)傷組；血清INF-γ含量創(chuàng)傷組低

7、于對(duì)照組，膿毒癥組更低；血清IL-4 含量創(chuàng)傷膿毒癥組較其它兩組略高，其余兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：建模后第1天膿毒癥組、RU 干預(yù)組及假手術(shù)組Th17細(xì)胞比例與對(duì)照組比較均升高；隨后膿毒癥組與RU 干預(yù)組Th17細(xì)胞比例繼續(xù)上升，第3天達(dá)到頂峰，假手術(shù)組較前無(wú)明顯變化；第7天膿毒癥組及RU 干預(yù)組Th17細(xì)胞比例下降，與假手術(shù)組間差異變?。坏?4天各組Th17細(xì)胞比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。膿毒癥組與RU 干預(yù)組間比較

8、差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。建模后第1天，膿毒癥組和RU 干預(yù)組Treg細(xì)胞比例均較對(duì)照組及假手術(shù)組明顯升高，第3天時(shí)略有下降，第3天后不斷增高；膿毒癥組和RU 干預(yù)組之間比較，膿毒癥組Treg細(xì)胞比例較RU 干預(yù)組高，在1d，3d 時(shí)相P＜0.05；假手術(shù)組與對(duì)照組比較，比例稍高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。膿毒癥組和RU 干預(yù)組第3天Th17/Treg 比值較正常升高，而第14天較對(duì)照組低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組間比較RU 干預(yù)組比值較高但各時(shí)相均

9、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。建模后1天，膿毒癥組、RU 干預(yù)組脾臟細(xì)胞RORγt mRNA 水平表達(dá)均較假手術(shù)組和正常對(duì)照組明顯升高，且在第3天達(dá)到峰值；隨后下降，第7d和14d與假手術(shù)組無(wú)明顯差異。膿毒癥組與干預(yù)組比較，干預(yù)組在第1天，第3天更高。建模后膿毒癥組，干預(yù)組及假手術(shù)組各時(shí)點(diǎn)Foxp3 mRNA 水平表達(dá)均較對(duì)照組高；三組間比較，第1天、第14天膿毒癥組及RU 干預(yù)組均明顯高于假手術(shù)組，第3天、第7天略有下降與假手術(shù)組差異變小；膿毒癥組與

10、干預(yù)組比較，前者略高于后者。膿毒癥組及RU干預(yù)組在第3天血清IL-17 含量明顯高于假手術(shù)組及對(duì)照組，此后回落，第7d、14d 各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；膿毒癥組與干預(yù)組比較干預(yù)組第3天稍高于膿毒癥組。膿毒癥組、干預(yù)組及假手術(shù)組IL-10含量均升高，膿毒癥組及干預(yù)組均明顯高于假手術(shù)組；其中第3天膿毒癥組及干預(yù)組都有少許下降，但仍高于假手術(shù)組。建模后膿毒癥組，干預(yù)組及假手術(shù)組血清IL-10 均高于對(duì)照組，其中膿毒癥組及干預(yù)組高于假手術(shù)組，膿

11、毒癥組與干預(yù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。膿毒癥組和RU 干預(yù)組在第1天，第3天血清IL-6 含量明顯高于假手術(shù)組和對(duì)照組，兩組間比較RU 干預(yù)組在第3天時(shí)相高于膿毒癥組。膿毒癥組和RU 干預(yù)組IL-2 含量較對(duì)照組及假手術(shù)組高，膿毒癥組及RU 干預(yù)組在第3天時(shí)相較其它時(shí)相略低，膿毒癥組及干預(yù)組兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清INF-γ含量膿毒癥組，干預(yù)組及假手術(shù)組均高于對(duì)照組，第1天干預(yù)組較膿毒癥組高，而后兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清IL-4

12、 含量ELISA 檢測(cè)結(jié)果顯示，各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DTH 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，假手術(shù)組和對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；膿毒癥組及RU 干預(yù)組DTH 反應(yīng)較對(duì)照組及假手術(shù)組弱，同時(shí)膿毒癥組與RU 干預(yù)組比較其反應(yīng)更弱。
　　 【結(jié)論】臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究均表明Th17細(xì)胞參與創(chuàng)傷膿毒癥中的炎癥反應(yīng)，Treg細(xì)胞參與膿毒癥中的抗炎反應(yīng)并維持遷延的免疫抑制狀態(tài)；膿毒癥時(shí)發(fā)生Th17/Treg 失衡，是膿毒癥后免疫功能紊亂的重要機(jī)制。GC