檉柳ThNAC7基因的抗逆功能解析.pdf

1、許多NAC基因的表達受干旱、高鹽和ABA的誘導，有研究顯示NAC基因調控了植物的抗逆能力，參與植物細胞的多種生物學過程。然而，NAC基因在抗逆調控中的詳細功能尚不清楚。本研究通過對檉柳(Tamarix hispida)中克隆出來的一條NAC基因ThNAC7的抗逆性機制進行了研究。
　　利用實時定量RT-PCR技術研究了ThNAC7基因對高鹽、干旱以及ABA脅迫的表達。結果表明，在檉柳幼的根部和莖葉組織，該基因均能夠被NaC1、PE

2、G和ABA誘導表達。
　　利用我們已經建立的瞬時侵染體系，同時我們采用三種方法對瞬時轉化過程進行改進，分別運用三種方法將表達載體轉入檉柳幼苗內，并對轉pBI121載體幼苗進行GUS染色。檢測到轉GUS基因在轉基因幼苗內的各組織均有表達。從而證明這三種轉化方法均能將過表達載體和抑制表達載體轉入檉柳植株內。通過GUS染色分析，轉化方法1要優(yōu)于方法2、3，方法1中的GUS基因，在侵染后第7周仍能檢測到GUS基因的表達。
　　構建的

3、ThNAC7基因的過表達載體pROK2-ThNAC7、RNAi抑制表達載體ThNAC7-RNAi以及對照載體pBI121，并將其瞬時轉化到檉柳中，獲得瞬時轉化的ThNAC7過表達、抑制表達及對照植株。對轉基因檉柳進行了實時定量PCR檢測，過表達檉柳中的NAC7基因表達量增加了4倍，而抑制表達檉柳植株的NAC7基因表達量明顯受到抑制，表達量是對照檉柳的1/6。說明，ThNAC7基因已經成功地在轉基因檉柳中實現了瞬時的過表達及抑制表達，可以

4、用于進一步的實驗。
　　利用組織化學染色包括NBT、DAB和依文思藍染色方法分析過表達、抑制表達和對照檉柳幼苗的活性氧清除能力和細胞的死亡程度。在非脅迫情況下，三者的活性氧積累和細胞膜受損情況相似，而在脅迫下，ThNAC7抑制表達檉柳活性氧積累和細胞膜受損情況明顯高于對照，而ThNAC7過表達檉柳的活性氧積累和細胞膜受損情況明顯低于對照。接著對三者的失水率、電解質滲透率、葉綠素含量以及MDA含量進行了進一步測定，過表達植株的植物細