異氟烷致新生大鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　探討臨床相關(guān)濃度的異氟烷對(duì)新生大鼠睪丸生殖細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制。本課題為最終闡明吸入性全身麻醉藥的生殖毒性及其作用機(jī)制,指導(dǎo)全身麻醉藥的安全合理應(yīng)用,以及探索其毒性作用的有效防治手段等方面提供了理論依據(jù)。
　　方法:
　　60只出生1天(P1d)雄性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組大鼠自主吸入空氣,實(shí)驗(yàn)組大鼠則分別暴露于1MAC異氟烷+30％O2中2h、4h和6h(2h組、4h組及6h組)。運(yùn)用TUNE

2、L法對(duì)大鼠睪丸生殖細(xì)胞的凋亡進(jìn)行評(píng)價(jià);Western Blot法對(duì)大鼠睪丸生殖細(xì)胞Bcl-2、Bax、細(xì)胞色素C(Cytochrome C)和活化Caspase-3蛋白質(zhì)表達(dá)水平進(jìn)行檢測;Real-Time PCR法對(duì)大鼠睪丸生殖細(xì)胞Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3 mRNA表達(dá)水平進(jìn)行測定。
　　結(jié)果:
　　TUNE結(jié)果顯示,對(duì)照組大鼠睪丸的生精小管內(nèi)很少出現(xiàn)凋亡的陽性細(xì)胞,異氟烷暴露2h、

3、4h、6h組均使大鼠睪丸的平均每生精小管內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)顯著增加。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸細(xì)胞Bcl-2蛋白水平表達(dá)下調(diào)(P<0.05);且Bcl-2蛋白的表達(dá)在6h組較4h組下調(diào)(P<0.05)。4h和6h組與空白對(duì)照組相比較,大鼠睪丸細(xì)胞Bcl-2 mRNA水平表達(dá)下調(diào)(P<0.05);Bcl-2 mRNA的表達(dá)在2h、4h和6h依次下調(diào)(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組大鼠的Bax的蛋白質(zhì)表達(dá)水平較對(duì)照組上調(diào)(P<0.05);4h暴露組與2

4、h暴露組相比,表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。4h、6h暴露組與空白對(duì)照組相比較,Bax mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)(P<0.05);Bax的mRNA的表達(dá)水平在2h、4h和6h依次上調(diào)(P<0.05)。與對(duì)照組比較,異氟烷暴露2h、4h、6h均使大鼠睪丸Cytochrome C蛋白表達(dá)增加(P<0.05)。Cytochrome C mRNA的表達(dá)在4h和6h組表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。睪丸內(nèi)活化Caspase-3蛋白及Caspase-3的mR

5、NA表達(dá)量在實(shí)驗(yàn)組均明顯升高,與空白對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);活化Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA的表達(dá)在2h組、4h組和6h組依次上調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　通過對(duì)新生大鼠暴露于異氟烷的研究證實(shí),P1d大鼠暴露于1MAC的異氟烷2h將致睪丸生殖細(xì)胞凋亡,隨著暴露時(shí)間延長至6h,其凋亡效應(yīng)呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。Bcl-2、Bax和Cytochrome C參與了異氟烷所致的新生大鼠