固本抑瘤Ⅱ號(hào)對(duì)乳腺癌抑瘤作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、乳腺癌是危害婦女健康的惡性腫瘤之一，居女性各類惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率之首。乳腺癌成年女性發(fā)病約1‰，每年約有7.9萬(wàn)新病例發(fā)牛，呈逐年增加趨勢(shì)，因此乳腺癌的預(yù)防與治療研究已經(jīng)成為刻不容緩的任務(wù)。傳統(tǒng)的手術(shù)及放、化療過(guò)程對(duì)病變組織和正常組織的選擇性較差，會(huì)引起各種并發(fā)癥和后遺癥，并造成機(jī)體的氣血耗傷，使患者的生存質(zhì)量及行為狀態(tài)均較差，因此具有一定的局限性。中醫(yī)藥在乳腺癌治療中所起的作用越來(lái)越不可替代。中醫(yī)認(rèn)為乳腺癌主要是由于臟腑虛損、血瘀

2、痰凝毒結(jié)而成。癌癥患者，尤其是中晚期癌癥患者普遍存在血瘀證或氣虛血瘀證，應(yīng)對(duì)證采用益氣活血法治療。益氣活血法屬于"扶正祛邪"范疇，具有益氣不留寇，驅(qū)邪不傷正的功效。固本抑瘤Ⅱ號(hào)(GYⅡ)是北京市中醫(yī)醫(yī)院治療氣虛血瘀證腫瘤患者的有效方劑，常配合化療應(yīng)用。臨床資料表明該方能夠改善患者生活質(zhì)量，減輕化療的毒副作用。 研究目的：探討固本抑瘤Ⅱ號(hào)治療乳腺癌的作用機(jī)制，為臨床治療乳腺癌提供理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)： 1.固本抑瘤Ⅱ號(hào)

3、及聯(lián)合化療對(duì)MCF-7人乳腺癌細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究 制備GYⅡ水提物及GYⅡ的含藥鼠血清。采用MTT法檢測(cè)GYⅡ、表阿霉素(EPI)、GYⅡ+EPI及20％、10％、5％濃度的GYⅡ的含藥鼠血清對(duì)MCF-7人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果顯示：GYⅡ?qū)CF-7人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)表現(xiàn)為抑制作用，GYⅡ?qū)CF-7人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制達(dá)到30％、50％時(shí)的生藥濃度分別是1.22mg/ml、3.25mg/ml；EPI隨著濃度的增加對(duì)MCF-

4、7人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用增強(qiáng)，EPI的IC<,30>、IC<,50>的濃度分別為0.095μg/ml、0.228μg/ml；GY Ⅱ與EPI聯(lián)合用藥指數(shù)q值在0.85～1.25之間，提示兩藥聯(lián)合應(yīng)用有相加作用；20％GY Ⅱ的含藥鼠血清在作用24h和48h后，對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別達(dá)到20.84％和23.91％，均大于20％，說(shuō)明含藥血清有細(xì)胞毒活性。 2.固本抑瘤Ⅱ號(hào)單獨(dú)及聯(lián)合化療對(duì)EMT-6小鼠乳腺癌治療作用的研

5、究 80只體重(19±1)g BALB/C雌性小鼠復(fù)制EMT-6小鼠乳腺癌動(dòng)物模型。隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組[Control]、EPI組[EPI](3mg/Kg腹腔注射)、GY Ⅱ低劑量組[S(GY Ⅱ)](13.7g/Kg·d灌胃)、GY Ⅱ中劑量組[M(GY Ⅱ)](27.3g/Kg·d灌胃)、GY Ⅱ高劑量組[H(GY Ⅱ)灌胃](54.6g/Kg·d)、GY Ⅱ低劑量+EPI組[S(GYⅡ)+EPI]、GY Ⅱ中劑量+EP

6、I組[M(GY Ⅱ)+EPI]、GY Ⅱ高劑量+EPI組[H(GY Ⅱ)+EPI]共8組，每組10只。觀察GYⅡ單獨(dú)及聯(lián)合EPI對(duì)EMT-6小鼠乳腺癌移植瘤及轉(zhuǎn)移瘤的作用。結(jié)果顯示：H(GYⅡ)、EPI、H(GYⅡ)+EPI平均出瘤時(shí)間的延遲率分別為22.45％、24.49％、28.57％；S(GYⅡ)、M(GYⅡ)、H(GY Ⅱ)組抑瘤率分別為13.6％、17.4％、34.38％，H(GY Ⅱ)組瘤重(1.722±0.555g)與對(duì)照

7、組瘤重(2.624±0.582g)有顯著差異(p<0.01)，各給藥組也不同程度地縮小了實(shí)體瘤的體積；S(GY Ⅱ)+EPI組、M(GY Ⅱ)+EPI組的q值均在0.85～1.15范圍內(nèi)，說(shuō)明聯(lián)合用藥有相加作用；GY Ⅱ單獨(dú)及EPI單獨(dú)應(yīng)用，對(duì)小鼠EMT-6小鼠乳腺癌自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移沒(méi)有明顯影響，S(GYⅡ)+EPI組、M(GYⅡ)+EPI組肺轉(zhuǎn)移灶(分別為2.9±1.0個(gè)、2.7±1.3個(gè))與對(duì)照組(5.5±1.5個(gè))差異顯著(p<0.0

8、5)。 3.固本抑瘤Ⅱ號(hào)對(duì)EMT-6荷瘤小鼠免疫功能的影響 復(fù)制EMT-6小鼠乳腺癌動(dòng)物模型。隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組Control、EPI、M(GY Ⅱ)、H(GY Ⅱ)、M(GY Ⅱ)+EPI 5組，每組10只。血球計(jì)數(shù)儀測(cè)量小鼠外周血的血常規(guī)，流式細(xì)胞儀測(cè)量外周血T細(xì)胞亞群水平；稱量脾及胸腺的重量，計(jì)算脾指數(shù)及胸腺指數(shù)；取腹腔沖洗液中性紅染色法測(cè)量巨噬細(xì)胞吞噬功能，用脾細(xì)胞采用MTT法檢測(cè)荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性、T淋

9、巴細(xì)胞增殖功能。結(jié)果顯示：GYH可增加外周血RBC數(shù)量Hb的含量，改善腫瘤的貧血狀態(tài)，對(duì)WBC的影響不明顯；GYⅡ能增加EMT-6荷瘤小鼠胸腺指數(shù)，對(duì)脾指數(shù)影響不大；GYⅡ單獨(dú)及聯(lián)合EPI均能增加EMT-6荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性，巨噬細(xì)胞吞噬功能，T淋巴細(xì)胞的增殖能力；GYⅡ能增加外周血CD3、CD4、CD8的水平；M(GYⅡ)組、M(GYⅡ)+EPI組的EMT-6荷瘤小鼠的平均活存時(shí)間分別為33.3±7.3d和33.5±6.3d，與對(duì)照

10、組23.6±6.87d比較，生存時(shí)間明顯延長(zhǎng)(p<0.05)。 4.GYⅡ單獨(dú)及聯(lián)合EPI對(duì)荷瘤MCF-7人乳腺癌裸鼠實(shí)體瘤細(xì)胞周期和凋亡的影響 48只體重(17±1)g BALB/C雌性裸鼠復(fù)制MCF-7人乳腺癌動(dòng)物模型。待腫瘤直徑生長(zhǎng)至0.6cm左右時(shí)，隨機(jī)分為6組，分別為Control、EPI(2mg/kg)、M(GY Ⅱ)、H(GY Ⅱ)、M(GYⅡ)+EPI、M(GY Ⅱ)+EPI，每組8只。給藥25天后處死小

11、鼠，摘取瘤組織稱重后計(jì)算抑瘤率；流式細(xì)胞儀測(cè)量小鼠實(shí)體瘤組織的凋亡指數(shù)和細(xì)胞周期。結(jié)果顯示：H(GYⅡ)的瘤重(1.59±0.39g)與對(duì)照組瘤重(2.49±1.35g)有顯著差異(p<0.05)，H(GYⅡ)+EPI瘤重(0.70±0.55g)與對(duì)照組及EPI組瘤重(1.04±0.73g)均有顯著差異(p<0.05)；聯(lián)合用藥的q值均在0.85～1.15，提示其在抑瘤方面有相加作用。GYⅡ?qū)θ橄侔┝鼋M織的細(xì)胞周期有一定的影響，GY Ⅱ

12、隨著劑量的增加腫瘤細(xì)胞在G0/G1期的分布有增加趨勢(shì)，且H(GYⅡ)組的GO/G1值(54.74±2.11)與對(duì)照組(50.71±2.07)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)，而G2/M期的分布有減少趨勢(shì)，對(duì)S期的影響不明顯，聯(lián)合用藥組對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的分布影響不明顯。GYⅡ單獨(dú)及聯(lián)合EPI均顯著促進(jìn)瘤組織凋亡。 結(jié)論：GY Ⅱ及含藥鼠血清在體外能抑制MCF-7人乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，具有抑瘤和化療增效作用；GY Ⅱ?qū)MT-6乳腺癌移