食管鱗癌中熱休克蛋白70的表達(dá)及意義.pdf

1、食管癌是廣泛分布于世界各地的全球性疾病，其發(fā)病率有明顯的地區(qū)性差異，中國(guó)是世界的食管癌高發(fā)區(qū)；盡管食管癌的診療水平有了明顯的提高，但它的遠(yuǎn)期生存率的改善仍非常緩慢，徹底治愈的希望依然寄托在患者被確診為癌癥時(shí)疾病所處的臨床分期。盡管腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是食管癌預(yù)后的主要影響因素，但在臨床實(shí)踐中可觀察到，在部分食管癌手術(shù)后長(zhǎng)期生存的患者中也有侵透食管纖維膜甚至侵及周圍軟組織、低分化癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，相反，在部分生存期短

2、的患者中也有腫瘤不大、高分化癌和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，因此要想對(duì)食管癌預(yù)后做出更準(zhǔn)確的判斷，仍需寄希望于基因水平的進(jìn)一步研究。 熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)是一個(gè)廣泛存在卻又高度保守的多肽類蛋白質(zhì)家族，按其分子量大小可分為HSP27,HSP60,HSP70，HSP90等。其主要功能是作為分子伴侶維護(hù)細(xì)胞生命活動(dòng)必需的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定，具有“看家”和細(xì)胞保護(hù)功能以及重要的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái)，HSP與臨床疾病特

3、別是與腫瘤的關(guān)系日益受到重視，HSP與腫瘤細(xì)胞凋亡、腫瘤免疫和腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系已成為腫瘤學(xué)、免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。其中HSP70與腫瘤預(yù)后的關(guān)系較為密切，目前研究表明HSP70在胃癌、乳腺癌和前列腺癌等患者體內(nèi)高表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，是預(yù)后不良的標(biāo)志。但有關(guān)HSP70在食管癌組織中表達(dá)和預(yù)后意義的研究很少，而且其研究結(jié)果不一致，HSP70影響食管癌預(yù)后的機(jī)制尚不清楚。在食管癌中，鱗癌是最主要組織學(xué)類型，約占95％左右。因此，

4、我們就HSP70與食管鱗癌的關(guān)系進(jìn)行了一系列研究。 第一部分，目的：探討HSP70與食管鱗癌預(yù)后的關(guān)系。 方法：收集臨床病理資料基本匹配的100例臨床資料和石蠟包埋腫瘤組織，用免疫組化方法研究其HSP70的表達(dá)情況。 結(jié)果：100例食管鱗癌組織中，90例HSP70蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為90％，而在15例正常粘膜中，只有2例HSP70蛋白呈弱陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為13.3％，而且僅局限于上皮基底層細(xì)胞，二者之間HSP

5、70的表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，食管鱗癌組織中HSP70蛋白的表達(dá)水平比正常食管粘膜明顯升高，提示HSP70可能參與了食管鱗癌的發(fā)生。在50例不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌病例中，有48例(96％)表達(dá)HSP70，而在50例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中，HSP70的表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)為42例(84％)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示HSP70的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。在48例術(shù)后生存期<3年的食管鱗癌病例中，有40例(83.3

6、％)表達(dá)HSP70，而在52例生存期>5年的病人中，HSP70的表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)為50例(96.1％)，陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HSP70蛋白的表達(dá)與預(yù)后有關(guān)，HSP70高表達(dá)者預(yù)后好。 結(jié)論：HSP70可以作為判斷食管鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的重要生物指標(biāo)之一。 第二部分，目的：探討食管鱗癌及正常食管黏膜組織中熱休克蛋白70(HSP70)的表達(dá)狀況及其意義。 方法：收集食管鱗癌組織33例，手術(shù)切除后立即于無(wú)菌

7、狀態(tài)下切取約0.5cm X 0.5cm X 0.8cm大小食管鱗癌組織及遠(yuǎn)切端正常食管粘膜組織，液氮速凍。提取新鮮組織中的蛋白質(zhì)并定量后，行SDS變性聚丙烯酞胺凝膠電泳，westernblotting檢測(cè)HSP70基因蛋白的表達(dá)；提取新鮮組織中的總RNA，采用半定量RT-PCR方法檢測(cè)HSP70基因Mrna的表達(dá)，以管家基因β-actin作為內(nèi)對(duì)照。應(yīng)用Image Tool 3.0圖象分析軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定量分析。分析HSP70基因蛋

8、白表達(dá)與食管鱗癌臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。 結(jié)果：在食管鱗癌中HSP70 Mrna和蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為100％和93.9％，與食管正常粘膜相比明顯升高(分別為69.7％和45.5％)；食管鱗癌組織和正常食管粘膜中的HSP70 Mrna的相對(duì)表達(dá)量分別為1.35±0.21和0.73±0.19，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)：HSP70基因蛋白表達(dá)與食管鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與年齡、性別和浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)。 結(jié)論：食管鱗癌組織中

9、HSP70基因表達(dá)水平明顯升高，且于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，HSP70基因可能參與了食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。 第三部分，目的：觀察熱休克蛋白70(HSP70)反義寡核苷酸阻斷食管鱗癌細(xì)胞Eca-109 HSP70 的表達(dá)及其對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖、凋亡和浸潤(rùn)能力的影響。 方法：分別應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和 Western blotting 技術(shù)檢測(cè)HSP70反義寡核苷酸(10 u mol/L)轉(zhuǎn)染食管鱗癌細(xì)胞Eca

10、-109后，HSP70基因Mrna和蛋白表達(dá)的變化；通過(guò)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線觀察HSP70反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)；利用流式細(xì)胞術(shù)分析轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期分布的改變；應(yīng)用Transwell小室觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞浸潤(rùn)能力的變化。 結(jié)果：HSP70 反義寡核苷酸阻斷了Eca-109細(xì)胞HSP70 Mrna和蛋白的表達(dá)；Eca-109 細(xì)胞增殖受到明顯抑制，在轉(zhuǎn)染后48h和72h，生長(zhǎng)抑制率分別為25.5％和35.4％；