抗乙肝病毒表面抗原PreS1（20-47）單鏈抗體基因克隆及其在大腸桿菌和煙草中的表達.pdf

1、乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)表位是重要的乙肝病毒(HBV)表位,其識別肝細胞受體,并與HBV侵染人肝細胞有關.高親和的抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)抗體具有封閉HBV的作用.噬菌體展示技術提供了獲得結合特異表位抗體的新途徑.我們用乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)體外免疫淋巴細胞,構建了抗PreS1(20-47)人源免疫抗體庫.所獲得的單鏈抗體的重鏈屬人抗體V<,H>4亞族,輕鏈屬人抗體V<,λ>4亞族,經(jīng)

2、檢測,確定該單鏈抗體能與PreS1(20-47)特異結合,其親合常數(shù)在10<'-7>-10<'-8>M范圍內(nèi),具有潛在的應用價值.用大腸桿菌和煙草分別表達編碼抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)表位單鏈抗體.融合硫氧還蛋白的單鏈抗體在大腸桿菌BL21(DE3)中以包涵體的形式得到高效表達,單鏈抗體表達量達占30﹪的總蛋白以上.經(jīng)變性復性,用固相金屬離子親和色譜法一步分離純化了具有功能的單鏈抗體,在一升的發(fā)酵液中得到78 mg的重組

3、蛋白.在用煙草作為生物反應器時,分別將該單鏈抗體靶向細胞質和內(nèi)質網(wǎng).經(jīng)Western Blot分析,靶向細胞質中表達時,可溶單鏈抗體最高占總的可溶蛋白的0.06﹪.而靶向內(nèi)質網(wǎng)中表達時,表達量達到總可溶蛋白的0.5﹪.以固相金屬離子親和色譜法,從轉基因煙草中一步分離到純度達90﹪的具有生物活性的單鏈抗體,每克葉片組織可獲得9μg重組蛋白.在水培條件下,轉基因煙草根可連續(xù)分泌具有活性的重組抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)單鏈抗體