SPK-S1P信號途徑對人肝癌細(xì)胞增殖、凋亡及VEGF表達(dá)的作用.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文SPKS1P信號途徑對人肝癌細(xì)胞增殖、凋亡及VEGF表達(dá)的作用姓名：姜大磊申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師：高艷景20070512山東人學(xué)碩十學(xué)位論文sPK／s1P信號途徑對人肝癌細(xì)胞增殖、凋亡及VEGF表達(dá)的作用碩士研究生：專業(yè)：姜大磊消化內(nèi)科學(xué)高艷景副教授中文摘要目的：1一磷酸鞘氨醇(sphingosine一卜phospate。SlP)、鞘氨醇激酶(sphingosinekinase，SPK)均

2、是細(xì)胞增殖及存活的重要信號分子，SlP由SPK磷酸化鞘氨醇(sphingosine，Sp)而成，已經(jīng)證實(shí)sPK／slP信號途徑在某些惡十牛腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，但對其具體作用機(jī)制尚未明確。肝癌為富含血管的腫瘤，血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)在肝癌中有高表達(dá)，對肝癌的生長和轉(zhuǎn)移有重要意義“1。SPK／S1P信號途徑是否具有調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)的作用目前國內(nèi)外均未見報(bào)道。本課

3、題應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等方法研究了SPK／s1P信號途徑對人肝癌細(xì)胞HepG2增殖、凋亡以及對VEGF的影響與作用機(jī)制。方法：人肝癌細(xì)胞株HepG2培養(yǎng)在含lo％新生牛血清的DM陰培養(yǎng)基中，置于5％c02、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)，O25％胰蛋白酶消化，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長狀況。采用對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。觀察5～20帥oL／L濃度范圍DMS(Dimethylsphingosine，鞘氨醇激酶的特異性抑制劑，N，N’一

4、二甲基鞘氨醇)對HepG2細(xì)胞增殖、調(diào)亡及分泌VEGF的影響。MTT法(四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法)檢測細(xì)胞的存活率，倒置相差顯微鏡及掃描電鏡觀察調(diào)亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)寥芝化，TUNEL(Terminaldeoxynucleotidemediatednickendlabeling)法檢測細(xì)胞的凋亡，雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme—linkedi腫unosorbentassay，ELISA)法檢測對肝癌細(xì)胞分泌VEGF的影響，RT—PC