胡楊大片段基因轉(zhuǎn)化擬南芥及轉(zhuǎn)化型分析.pdf

1、胡楊（Populus euphratica）作為楊屬（Populus）最古老的物種之一，具有極強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力，是研究木本植物耐受鹽堿、干旱、高溫等極端逆境性狀的優(yōu)良材料。基因工程技術(shù)迅速發(fā)展之后，胡楊研究的主要領(lǐng)域從以組織培養(yǎng)為中心的一系列生理生化實(shí)驗(yàn)延伸向分子領(lǐng)域。研究證明，雖然以親緣植物為模板克隆基因研究胡楊的耐鹽堿模式在方法上可行，但因?yàn)槲锓N差異和基因表達(dá)調(diào)控的復(fù)雜性，不能深入和徹底地闡明胡楊應(yīng)對脅迫環(huán)境的分子機(jī)制。隨著技術(shù)和新

2、的科研成果誕生，對胡楊基因的挖掘分析從單一基因、單一信號通路途徑發(fā)展到多基因、多信號通路途徑是主要趨勢。本學(xué)位論文使用胡楊基因組大片段插入pCLD04541質(zhì)粒構(gòu)建的BIBAC（Binary Bacterial Artificial Chromosome，BIBAC）文庫，花序浸染法(Floral-dip)轉(zhuǎn)化野生型擬南芥（Arabidopsis thaliana）后，通過篩選表現(xiàn)出特異生長性狀的轉(zhuǎn)化型植株并分析，旨在完善胡楊轉(zhuǎn)化基因組

3、學(xué)研究平臺，進(jìn)一步篩選胡楊特異的性狀基因（簇）。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)使用102個文庫克隆，共轉(zhuǎn)化1320株擬南芥，得到T1代分子檢測陽性植株225株，共34個株系，其中有可觀察性狀的株系6個。由于有敗育情況發(fā)生，最終獲得性狀可穩(wěn)定遺傳的株系5個，主要集中于植株主莖和花序發(fā)育、側(cè)莖分枝形成、種子形成等方面。
　　(2)收集了可觀察性狀克隆下的植株形態(tài)數(shù)據(jù)，并進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計分析。發(fā)現(xiàn)形態(tài)上的變化主要有:變小、無柄、無茸毛

4、，主莖或缺失，花序消失，果莢變短或敗育，果莢增生、數(shù)目增多，種子增大、增重，等。
　　(3)發(fā)現(xiàn)了轉(zhuǎn)化型植株中2例矮化、敗育型，1例果莢縮短、種子減產(chǎn)型，3例發(fā)育快速、植株高大型并種子增大、增重型，并對其產(chǎn)生原因進(jìn)行了分析。分析發(fā)現(xiàn)，68A1G5、68B1E2兩個株系對野生型擬南芥矮化明顯，花序消失，出現(xiàn)不同程度的敗育;68A1E3株系對野生型擬南芥發(fā)育異常，果莢明顯縮短，種子數(shù)量驟減;68A1B2、78B1B9、78B2A6三個